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          Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

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          • 所在地 上海市

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          更新時(shí)間:2022-04-21 10:46:45瀏覽次數(shù):276

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          產(chǎn)品簡(jiǎn)介

          供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50次
          貨號(hào) GOY-01X9556 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
          主要用途 公司產(chǎn)品僅供科研 英文名稱 MTS?Cell?Proliferation?And?Cytotoxicity?Detection?
          Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品:Aurora B 有絲分裂激酶B抗體二十六烷 分析標(biāo)準(zhǔn)品, ≥99.5% (GC)
          Aurora C 有絲分裂激酶B抗體七氟丁 離子色譜級(jí)
          Aurora A/B/C 有絲分裂激酶A/B/C抗體DL-高半胱氨 95%
          B7-H1/CD274 程序性死亡配體1抗體5-羥糠 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>99%
          B7-DC/CD273

          詳細(xì)介紹

          商品介紹:

          本試劑盒是一種采用Annexin V-FITC與PI雙染法進(jìn)行細(xì)胞早期凋亡分析的檢測(cè)試劑盒。

          細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面,這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外,使PS暴露在細(xì)胞膜外表面。PS是一種帶負(fù)電荷的磷脂,正常主要存在于細(xì)胞膜的內(nèi)面,在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)細(xì)胞膜上的這種磷脂分布的不對(duì)稱性被破壞而使PS暴露在細(xì)胞膜外。Annexin V具有易于結(jié)合到磷脂類如PS的特性,對(duì)PS有高度的親和性。因此,該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測(cè)暴露在細(xì)胞膜表面的PS。PS轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是凋亡所*的,也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中。兩種細(xì)胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細(xì)胞膜是完好的,而細(xì)胞壞死在其早期階段細(xì)胞膜的完整性就被破壞。另外一種活細(xì)胞非透過性熒光染料碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)不能通過完整的活細(xì)胞,但能夠?qū)乃篮偷蛲鐾砥诘募?xì)胞進(jìn)行染色, 因此通常將Annexin V與PI配合染色, 以區(qū)別凋亡早期細(xì)胞與壞死細(xì)胞和凋亡的晚期細(xì)胞。

          操作步驟:

          1、細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:

          a.對(duì)于貼壁細(xì)胞:小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用胰酶消化細(xì)胞,至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時(shí),加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下所有的貼壁細(xì)胞,并輕輕吹散細(xì)胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000×g左右離心3-5分鐘,沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞,如果細(xì)胞沉淀不充分,可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細(xì)胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,再次離心沉淀細(xì)胞,小心吸除上清。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,再次離心沉淀細(xì)胞。

          b.對(duì)于懸浮細(xì)胞:1000×g左右離心3-5分鐘,沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞,如果細(xì)胞沉淀不充分,可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細(xì)胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,并轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞,小心吸除上清,可以殘留約50μl左右的PBS,以避免吸走細(xì)胞。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,再次離心沉淀細(xì)胞。

          2、用去離子水按 1:3 稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去離子水)。

          3、用 250μl Binding Buffer重新懸浮細(xì)胞,調(diào)節(jié)其濃度為 1×106/ml。

          4、取 100μl 的細(xì)胞懸液于 5ml 流式管中,加入 5μl Annexin V/FITC 和 10μl 20μg/ml的PI溶液。

          5、混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘。

          6、在反應(yīng)管中加 400μl PBS,流式細(xì)胞儀(FACS)分析。

          儲(chǔ)存條件:2~8℃,避光保存

          以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:

          中文名稱

          英文名稱

          產(chǎn)品規(guī)格

          發(fā)貨周期

          Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

          Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

          50次

          1~3天


          操作步驟:

          1. 樣品染色

          1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。

          2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

          對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

          3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。

          4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

          5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。

          2. 樣品檢測(cè)

          1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):

          染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。

          建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

          2) 熒光顯微鏡檢測(cè):

          染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
          公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:

          一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

          1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。

          2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

          3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。

          二.細(xì)胞處理:

          1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

          2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

          對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

          方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

          抗增殖細(xì)胞核抗原抗體(PCNA)英文名稱:PCNA ELISA Kit肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體包裝5ml

          (AT)英文名稱:AT ELISA Kit蛋白激A2抗體包裝1g

          抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)英文名稱:PA-IgG/M/A ELISA Kit血管緊張Ⅱ受體2抗體包裝5g

          抗心磷脂抗體IgM(ACA-IgM)英文名稱:ACA-IgM ELISA KitASH1蛋白抗體包裝100g

          抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)英文名稱:ACA-IgG ELISA Kit芳香乙酰脫乙?;鶚拥鞍?抗體包裝25g

          抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)英文名稱:ACA-IgA ELISA Kit血管內(nèi)皮遷移蛋白抗體包裝5g

          抗心肌抗體(AMA)英文名稱:AMA ELISA Kit糖還原相關(guān)蛋白質(zhì)抗體包裝100g

          抗小核糖核蛋白/Sm抗體(snRNP/Sm)英文名稱:snRNP/Sm ELISA Kit膽汁結(jié)合蛋白DDH2抗體包裝25g

          抗線粒體抗體(AMA)英文名稱:AMA ELISA Kit血管生成樣蛋白3抗體包裝500g

          抗透明帶抗體IgG(aZP-IgG)英文名稱:aZP-IgG ELISA Kit甘油酯激線粒體抗體包裝50MG

          抗透明帶抗體(aZP)英文名稱:aZP ELISA Kit磷化內(nèi)收蛋白a1抗體包裝25ml

          抗雙鏈DNA抗體(dsDNA)英文名稱:dsDNA ELISA Kit自噬體ATG16L2蛋白抗體包裝1g

          抗平滑肌抗體(ASMA)英文名稱:ASMA ELISA Kit性磷抗體包裝100g

          抗凝血受體(ATR)英文名稱:ATR ELISA Kit性磷抗體包裝25g

          抗凝血Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)英文名稱:AT-Ⅲ ELISA Kit光激A相互作用蛋白1抗體包裝25g

          粘附相關(guān)激抗體B-淋巴激活抗原B7-2(LAB7-2)Palbociclib hydrochloride是高選擇性的 CDK4/6 抑制劑,IC50 分別為11 nM 和 16 nM。
          Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒大腸桿 5-氟-2-甲氧基苯甲蛋白酪氨酸磷酸酶檢測(cè)試劑盒

          鮭色沉積物桿狀 Fmoc-Glu(EDANS)-OtBu蛋白酪氨酸磷酸酶檢測(cè)試劑盒

          籃狀屬 5-甲氧基苯并[B]噻吩-2-酸蛋白酪氨酸磷酸酶1B檢測(cè)試劑盒

          平菇 2-氨基-5-甲基噻吩-3-羧酸甲酯蛋白磷酸酶檢測(cè)試劑盒

          三葉草根瘤 N-Boc-3-溴甲基蛋白酶激活受體4檢測(cè)試劑盒

          毛柄(金針菇) 3-氟-4-甲蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶檢測(cè)試劑盒

          異常漢遜酵母異常變種 2-氯-6-基異硫酸酯刀豆素A檢測(cè)試劑盒

          土曲霉 1,3-二氯-2-苯低半乳糖化IgA檢測(cè)試劑盒

          釀酒酵母 4-(2-氨基乙基)哌-1-甲酸叔丁酯低分子肝素檢測(cè)試劑盒

          凍土毛霉 2-甲基-3-噻吩甲酸低密度脂蛋白檢測(cè)試劑盒

          硬炭團(tuán) 4-N-Cbz-2-羥甲基哌低密度脂蛋白膽固檢測(cè)試劑盒

          泛養(yǎng)副球 4-甲苯磺酰低密度脂蛋白受體檢測(cè)試劑盒

          菲爾德斯半島擬諾卡氏 1,2,3,4-四氫-1-萘甲酸低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白1檢測(cè)試劑盒

          米曲霉 2-溴苯并[9,10]菲低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白4檢測(cè)試劑盒

          還原硫酸鹽互營(yíng)桿* 2-異基苯低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5檢測(cè)試劑盒

            


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