商品介紹:
用途: 檢測(cè)細(xì)胞凋亡 注意事項(xiàng): 細(xì)胞死亡判斷的生物化學(xué)方法,橙(AO)能透過(guò)活細(xì)胞膜,嵌入細(xì)胞核DNA,使之發(fā)出明亮的綠色熒光。溴乙錠(EB)僅能透過(guò)胞膜受損的細(xì)胞,嵌入核DNA,發(fā)紅光?;罴?xì)胞呈綠色熒光,死細(xì)胞呈橙色熒光。試劑盒主要有AO染色液、EB染色液組成。 儲(chǔ)存條件:4℃,避光,6個(gè)月 |
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:AO/EB雙熒光染色試劑盒
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:100T
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
人參皂苷F1(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: p-Anisaldehyde (contains Acetic Acid, H2SO4) Ethanol Solution間隙連結(jié)蛋白31.9抗體包裝5g
人參皂苷F2(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dimethyl Sulfoxide-d6 99.9atom%D甘油激2抗體包裝100g
人參皂苷F3(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Deuterium Oxide 99.8atom%Dβ-半乳糖苷1/β-Gal/彈性蛋白受體1抗體包裝25g
人參皂苷F4,人參皂苷Rg4(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sodium 3-(Trimethylsilyl)-1-propanesulfonate 甘脫羧P蛋白抗體包裝5g
人參皂苷F5(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dimethylselenide核孔蛋白GLE1抗體包裝1g
人參皂苷Rb1(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tetramethyltin腎小球上皮蛋白1抗體包裝250mg
人參皂苷Rb2(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Zirconocene Dichloride轉(zhuǎn)錄因子Gli4/鋅指蛋白gli4抗體包裝1g
人參皂苷Rb3(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Chirabite-AR麥角蛋白抗體包裝250mg
人參皂苷Rc(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tris(2,2,6,6-tetramethyl-3,5-heptanedionato)praseodymium(III) 膠質(zhì)瘤發(fā)病相關(guān)蛋白1抗體包裝5mg
人參皂苷Rd(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tris(2,2,6,6-tetramethyl-3,5-heptanedionato)europium(III)糖基轉(zhuǎn)移25結(jié)構(gòu)域1/前膠原半乳糖基轉(zhuǎn)移1抗體包裝1g
人參皂苷Rd2(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tris(6,6,7,7,8,8,8-heptafluoro-2,2-dimethyl-3,5-octanedionato)praseodymium(III)谷酰酰解抗體包裝25g
人參皂苷Re(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: (S)-(+)-1,1'-Binaphthyl-2,2'-diyl Hydrogen Phosphate糖基轉(zhuǎn)移25結(jié)構(gòu)域2/前膠原半乳糖基轉(zhuǎn)移2抗體包裝5g
人參皂苷Rf(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: (R,R)-(-)-2,3-Butanediol糖基轉(zhuǎn)移28家族1抗體包裝100g
人參皂苷Rg1(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: (S,S)-(+)-2,3-Butanediol糖基轉(zhuǎn)移6結(jié)構(gòu)1抗體包裝25g
人參皂苷Rg2(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: (-)-Camphanic Acid膠質(zhì)瘤抑癌候選基因2抗體包裝1g
楊氏檸檬桿菌Citrobacter│youngae 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP grade尿嘧啶核苷磷化1試劑盒藜蘆;Veratryl alcohol
達(dá)氏擬諾卡氏菌Nocardiopsis│dassonvillei 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品尿激型纖溶原激活物受體試劑盒化天竺葵;Di-tert-octyl
紅曲紅曲Monascus│anka 質(zhì)量規(guī)格:>98%標(biāo)準(zhǔn)品尿激型纖溶原激活物試劑盒硫;Brucine sulph
AO/EB雙熒光染色試劑盒異常漢遜酵母 3,5-二氟苯甲基質(zhì)金屬蛋白19Elisa
粟酒裂殖酵母 3-氟-4-嗎啉基苯基質(zhì)金屬蛋白20Elisa
深凹杯傘 2-氯-3-(三氟甲基)苯甲乙酰CoA羧化2Elisa
槐生多年臥孔 2,4-二氯噻唑-5-甲D類清道夫受體8Elisa
綠色木霉 3-正基吡唑-5-甲酸乙酯蛋白激c eta型Elisa
鴨疫里氏桿 葉解整合金屬蛋白23Elisa
皮殼青霉 反式-2-己烯聚乙二主鏈的IgM抗體Elisa
麥根腐平臍蠕孢 苯海拉明微管關(guān)聯(lián)蛋白R(shí)P;EB家族成員1Elisa
大腸桿 氧雜蒽15-脂氧合Elisa
多主葡萄殼 3-乙酰乙基葡萄糖酸苷Elisa
耐寒短桿 N-Boc-D-天冬氨酸 1-芐酯富含脯氨酸同源蛋白1抗體Elisa
大腸埃希氏 3-甲羥基氮雜環(huán)丁烷鹽酸鹽二肽基肽Elisa
中間普氏 2-氨基-6-氯煙酸色B還原1Elisa
平田頭菇3-1 3-羥基-4-(1-萘基偶氮)-2,7-萘二磺酸二鈉可溶性白分化抗原40配體Elisa
鐮雄腐霉 萘酚AS脫羧S-腺苷蛋氨酸Elisa