以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
用途: 軟骨染色,主要顯示羥基酸性粘液物質(zhì) 注意事項(xiàng): 主要由酸化液、Alcian 染色液(PH2.5)組成。染色結(jié)果為:酸性黏蛋白呈藍(lán)色,細(xì)胞核呈淺藍(lán)色。 儲(chǔ)存條件:4℃,避光,12個(gè)月 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
(R型)人參皂苷Rh1(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Mevastatin透明質(zhì)/玻璃抗體包裝500g
(R型)人參皂苷Rh2英文名稱: Mevastatin肝生長(zhǎng)因子激活物抑制劑抗體包裝25g
(S型)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 6-Aminopenicillanic acidHA tag標(biāo)簽單克抗體包裝5g
(S型)人參皂苷Rh2(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Asparaginase血紅抗體包裝1g
(S型)原人參三英文名稱: N-Carbobenzyloxy-L-alanine戊型肝炎病抗體包裝25g
(±)-柚皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Z-Gln-OH神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白1抗體包裝5g
1,2,3,4,6-O-沒(méi)食子酰葡萄糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: CBZ-L-Gly神經(jīng)膠質(zhì)生長(zhǎng)因子/神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白β抗體包裝25g
1,2-O-Dilinoleoyl-3-O-β-D-g...英文名稱: Proparacaine HCl組三聚體核苷結(jié)合蛋白1抗體包裝5g
1,3-二咖啡??鼘?標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Z-Ser-OH組蛋白去乙酰化3抗體包裝100g
1,7-雙-5-羥基-6-庚烯-3-英文名稱: Z-Thr-OH高度發(fā)散同源異型盒蛋白抗體包裝25g
1,8-桉葉英文名稱: Z-β-Ala-OH腺病六鄰體蛋白抗體包裝5g
1-羥基-3,4,5-三氧山(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Z-Glu-OBzl高密度脂蛋白結(jié)合蛋白抗體包裝100g
10-姜酚(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Z-Tyr-OH轉(zhuǎn)錄因子HNF-3α抗體包裝25g
10-羥基癸(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Z-Tyr-OMe熱休克蛋白β7抗體包裝500g
10-羥基癸烯,10-HDA(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Amoxicillin sodiumE3連接抑制受體2抗體包裝1g
金色橫隔分裂鏈霉菌Streptomyces│aureosegmentosus 質(zhì)量規(guī)格:含量測(cè)定磷脂爬行1試劑盒5-基糠;5-Methyl furf
冷海希瓦氏菌Shewanella│frigidimarina 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于培養(yǎng)磷脂D2試劑盒芥子堿硫鹽;Sinapine thi
ATCC21885資源名稱: 谷棒桿菌 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品磷脂A2受體抗體試劑盒4-氧基;2-Hydroxy-4
軟骨染色液(阿利新藍(lán)法,pH2.5)Luteolibacter 椰子油氨基糖苷類-3-磷酸轉(zhuǎn)移2Elisa
小葉相思根瘤 玉米油脫氫抗壞血Elisa
類諾卡氏屬 玉米油還原型抗壞血酸Elisa
梭屬 松油過(guò)氧化物Elisa
蘇云金芽胞桿亞亞種 薰衣草油乙酸氧化Elisa
叢毛紅曲 5- 羧基熒光二乙酸酯黑條矮縮病Elisa
東方伊薩酵母 N-Boc-N'-芐氧甲基-L-組氨酸α-L阿拉伯呋喃糖苷Elisa
釀酒酵母 1-丁基-3-甲基咪唑氯鹽β半乳糖苷Elisa
蠟樣芽孢桿 氯化1,3-二甲基咪唑β-淀粉Elisa
禽白血病病 4-正戊氧基苯乙炔酸性轉(zhuǎn)化Elisa
淡紫青霉 4-戊基苯乙炔中性轉(zhuǎn)化Elisa
印度芽孢桿 1-丁基-4-乙炔基苯乙二1Elisa
洋蔥伯克霍爾德氏 Gly-DL-Asp多糖Elisa
絨毛栓 2-氨基-6-吡啶甲可溶性多糖Elisa
酮丁梭 3-溴-4-氟苯甲赤霉1Elisa