產(chǎn)品屬性:
中文名稱:DAPI雙鏈DNA染料
英文名稱:DAPI dihydrochloride
產(chǎn)品規(guī)格:10mg
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
DAPI,也稱DAPI dihydrochloride,是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強(qiáng)20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比,對(duì)雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。因?yàn)镈API是含有特定AT序列DNA的一種嵌入劑,它能像Hoechst染料一樣粘附在DNA雙螺旋的小溝區(qū)。盡管DAPI不能通過(guò)活細(xì)胞膜,但卻能穿透擾亂的細(xì)胞膜而對(duì)核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平,能用來(lái)檢測(cè)酵母線粒體DNA,葉綠體DNA,病毒DNA,microplasm DNA以及染色體DNA。DAPI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為360nm和460nm。 DAPI染色常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè),染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。推薦工作濃度為0.5-10μg/ml。 CAS:28718-90-3 分子式:C16H17Cl2N5 分子量:350.25 純度:>90% (from N) 注意事項(xiàng) 1)DAPI對(duì)人體有一定刺激性,請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。 2)熒光染料都存在淬滅的問(wèn)題,建議染色后盡量當(dāng)天完成檢測(cè)。 3)為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。 4)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
核糖核A3(RNASE3)英文名稱:RNASE3 ELISA Kit22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框15抗體包裝1g
核受體亞家族3C組成員1(NR3C1)英文名稱:NR3C1 ELISA Kit22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框13抗體包裝25g
核仁(NCL)英文名稱:NCL ELISA Kit22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框26抗體包裝5g
核仁磷蛋白(NPM)英文名稱:NPM ELISA Kit補(bǔ)體C2b鏈多肽抗體包裝1g
核連蛋白1(NUCB1)英文名稱:NUCB1 ELISA Kit2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框16抗體包裝5g
核苷還原M1(RRM1)英文名稱:RRM1 ELISA Kit2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框27抗體包裝25g
和肽(CPP)英文名稱:CPP ELISA Kit磷化δ連環(huán)蛋白抗體包裝5g
含血管性血友病因子A域蛋白3A(vWA3A)英文名稱:vWA3A ELISA Kit磷化δ連環(huán)蛋白抗體包裝1g
含血管性血友病因子A域蛋白1(vWA1)英文名稱:vWA1 ELISA Kit磷化δ連環(huán)蛋白抗體包裝5g
含銅胺氧化3(AOC3)英文名稱:AOC3 ELISA Kit磷化δ連環(huán)蛋白抗體包裝1g
含亮豐富重復(fù)蛋白3C(LRRC3C)英文名稱:LRRC3C ELISA Kit磷化δ連環(huán)蛋白抗體包裝5g
含TCP1伴侶蛋白亞基2(CCT2)英文名稱:CCT2 ELISA Kit磷化δ連環(huán)蛋白抗體包裝25g
含STIP1同源物U-框蛋白1(STUB1)英文名稱:STUB1 ELISA Kit22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框43抗體包裝5g
含IQ基元GTP激活蛋白2(IQGAP2)英文名稱:IQGAP2 ELISA KitC2CD3蛋白抗體包裝100g
含IQ基元GTP激活蛋白1(IQGAP1)英文名稱:IQGAP1 ELISA Kit半胱蛋白蛋白14抗體包裝25g
鮑氏志賀菌Shigella│boydii 質(zhì)量規(guī)格:> 99%,BR,可用于培養(yǎng)粘蛋白3試劑盒異香草;Isovanillic Aci
草螺菌屬Herbaspirillum│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR粘蛋白2試劑盒煙堿;L-Nicotine
光黑腹菌Rhizopogon│piceus Berk. & M.A. Curtis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>97%,標(biāo)準(zhǔn)品增殖誘導(dǎo)配體試劑盒3-異倒捻子;3-isomangost
DAPI雙鏈DNA染料大腸埃希 阿那曲唑抗抗體Elisa
平臍蠕孢 酸-1-苯乙酯ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1Elisa
紅色皺紋單胞 N-哌甲酸乙酯膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白Elisa
平臍蠕孢 芐基三丁基三溴化銨谷氨酸脫氫Elisa
大麗花輪枝孢(棉花黃萎病) 鋯硅酸鈉萊姆病IgG抗體Elisa
七鉬酸銨胸腺β10Elisa
玫瑰紫青霉 3,4-二氯肉桂酸(反式)磷酸二酯5Elisa
Chitinophaga rupis 鎳鋁粒巨噬集落激因子抗體Elisa
棕黑腐質(zhì)霉 2,5-二氟苯磺酰綠膿桿外AElisa
黑根霉 4-溴丁基苯基β氨基己糖苷Elisa
聚生殼 5,6-二甲氧基-2-(4-甲基)-1-茚酮鹽酸鹽芳香N-乙?;D(zhuǎn)移Elisa
炭疽芽胞桿 4-(5-溴-3-氯-2-吡啶基)嗎啉白酯Elisa
解淀粉芽孢桿 4-羥基扁桃酸唾液酸苷Elisa
羊肚(不能訂購(gòu)) 2-氯-4-(4-氯苯氧基)苯乙酮DNA甲基化轉(zhuǎn)移Elisa
釀酒酵母 5-氨基-2-萘磺酸腸道病71型Elisa
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)