以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
nMDA是nMDA receptor的激動(dòng)劑,能夠模仿谷氨酸鹽的活動(dòng)。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):6384-92-5 別名:N-Methyl-D-aspartic acid 純度:98.0% 分子式:C?H?NO? 分子量:147.13 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
鮑魚側(cè)耳層粘蛋白α2抗體Human p35 ELISA Kit水通道蛋白0(AQP-0)ELISA Kit
冷海水黃桿菌內(nèi)皮脂肪抗體Human OXER1 ELISA Kit雙氫睪(DHT)ELISA Kit
短密青霉可溶性凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1抗體Human OXCT2 ELISA Kit衰變加速因子(DAF/CD55)ELISA Kit
鞘單胞菌屬層粘連蛋白β2抗體Human p35 ELISA Kit鼠嗜粒趨化因子(ECF)ELISA Kit
錐形赤褶菇白衍生化學(xué)吸引抗體Human P4HA3 ELISA Kit瘦受體(LeptinR)ELISA Kit
豬丹絲菌T淋巴易位蛋白2抗體Human OXER1 ELISA Kit瘦受體(LEPR)ELISA Kit
越南芽孢桿菌酪磷受體相互作用蛋白Liprin α1抗體Human OTOP3 ELISA Kit瘦(Leptin)ELISA Kit
紅緣層孔菌線粒體離子肽1抗體Human OTOR ELISA Kit瘦(LEP)ELISA Kit
平田頭菇10-4微管相關(guān)蛋白輕鏈3C抗體Human P4HA3 ELISA Kit受體型酪蛋白磷樣N(PTPRN)ELISA Kit
大腸埃希菌假定腫瘤抑制亮拉鏈蛋白1抗體Human USO1(Protein USO1 homolog) ELISA Kit受體酪激(RTKs)ELISA Kit
嗜乳桿菌乳脫氫LDH-C(腫瘤/抗原32)抗體Human p130Cas ELISA Kit受體TNFRSF結(jié)合絲蘇激2(RIPK2)ELISA Kit
高盧蜜環(huán)菌腫瘤抑制基因LUCA15抗體Human p150 glued ELISA Kit受磷蛋白(PLN)ELISA Kit
黑根霉淋巴特異性轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體Human P15RS ELISA Kit嗜伊紅顆粒主要堿性蛋白(EMBP/MBP)ELISA Kit
聚生殼菌RNA聚合相關(guān)蛋白LEO1抗體Human p19 INK4d ELISA Kit嗜性粒陽(yáng)離子蛋白(ECP)ELISA Kit
枯草芽孢桿菌枯草亞種磷化低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6抗體Human ACP5(TartRate-resistant acid phosphatase type 5) ELISA Kit嗜性白血球相關(guān)之RNA水解酵家族成員3(EAR3)ELISA Kit
沃氏富鹽菌磷化淋巴特異性蛋白酪激抗體Human OVCA2 ELISA Kit嗜性白血球相關(guān)之RNA水解酵家族成員2(EAR2)ELISA Kit
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:鋁和其他金屬等用分光光度試劑安石榴甙
耐鹽玫瑰色鮮艷菌Roseivivax│halodurans 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)羅漢果皂苷V
檸檬色節(jié)桿菌Arthrobacter│citreus 質(zhì)量規(guī)格:用于血液中銅的測(cè)定
nMDA受體激動(dòng)劑(NMDA)Cyclin C 周期C抗體苯芐酯 ≥99%, FCC
Cyclin D1 周期D1抗體芐酯 99%
Phospho-Cyclin D1 (Thr286) 化cyclin D1抗體芐酯 ≥99%, FCC, FG
Cyclin D2 周期D2抗體芐酯 ≥99.7% (GC
Cyclin D3 周期D3抗體丁酯 95%
Cyclin E 周期E抗體丁酯 Standard for GC
phospho-Cyclin E(Thr395) 化周期E抗體仲丁 99%
phospho-Cyclin E(Thr62) 化周期E抗體乳丁酯 98%