以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Tirasemtiv是一種快速骨骼肌型肌鈣蛋白復(fù)合物激活劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1005491-05-3 別名:CK-2017357 純度:99.90% 分子式:C??H??N?O 分子量:230.27 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
擬土黃紅菇原癌基因2抗體Human PARP11 ELISA Kit性富亮核磷蛋白32家族成員E(ANP32E)ELISA Kit
十字斯氏格孢賴酰氧化樣蛋白4抗體Human PARP15 ELISA Kit性成纖維生長因子1(aFGF-1)ELISA Kit
美澳型核果褐腐病菌乳鐵蛋白抗體Human PAOX ELISA Kit性成纖維生長因子(aFGF/FGF-1)ELISA Kit
蓖麻炭疽盤孢菌層粘連蛋白1+2抗體Human PAPD5 ELISA Kit性成纖維生長因子(aFGF)ELISA Kit
漏斗狀側(cè)耳(鳳尾菇)富含亮重復(fù)蛋白15抗體Human PARP3 ELISA Kit松弛肽/松弛(RLN)ELISA Kit
大腸埃希菌受體蛋白酪磷F抗體Human PARP9 ELISA Kit松弛(RLN)ELISA Kit
小環(huán)綿盤菌磷化5-脂氧合抗體Human PARP6 ELISA Kit四氫生物蝶呤(BH4)ELISA Kit
郝氏鏈霉菌低分子質(zhì)量蛋白2抗體Human PAPOLB ELISA Kit四連接(CLEC3B)ELISA Kit
德爾布有孢酵母單絲蛋白激1抗體Human PAPOLG ELISA Kit死亡相關(guān)蛋白1(DAP/DAP1)ELISA Kit
梨生囊殼孢菌低分子量蛋白體7抗體Human PAPSS1 ELISA Kit絲狀血球凝集(FHA)ELISA Kit
黑曲霉促黃體生成抗體Human PAK6(Serine/threonine-protein kinase PAK 6) ELISA Kit絲裂原激活的蛋白激/MAP激(MAPK)ELISA Kit
擬青霉層粘蛋白α1抗體Human PAK4 ELISA Kit絲裂原活化蛋白激激6(MKK6)ELISA Kit
巨大芽胞桿菌LETM1蛋白抗體Human PALB2 ELISA Kit絲裂原活化蛋白激(MAPK)ELISA Kit
黃色毛霉乳脫氫抗體Human PAMR1 ELISA Kit絲肽2甘露聚糖結(jié)合凝集(MASP2)ELISA Kit
桔青霉磷化絲/蘇蛋白激抗體Human BRCA1(Breast cancer type 1 susceptibility protein) ELISA Kit絲蛋白抑制因子肽抑制因子進(jìn)化枝3G(Serpina3g)ELISA Kit
茶薪菇層粘連蛋白β1抗體Human PANK1 ELISA Kit絲蛋白HTRA1(HTRA1)ELISA Kit
產(chǎn)克雷伯菌Klebsiella│oxytoca 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)芒柄花黃
植物乳桿菌Lactobacillus│plantarum 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(T)洛伐他汀
冬蟲夏草Cordyceps│sinensis 質(zhì)量規(guī)格:堿性稀土金屬用的分光光度試劑及硫根用鋇的沉淀滴定指示劑朝藿定C
快速骨骼肌型肌鈣蛋白復(fù)合物激活劑Connexin-32 間隙連接蛋白32抗體戊酯 CP,98.5%
Connexin-36 間隙連接蛋白36抗體茴香 98%
Connexin-40 間隙連接蛋白40抗體縮 CP,97%
Connexin 43 Cx-43蛋白抗體縮 Standard for GC,>99%(GC)
Phospho-Connexin 43 (Ser368) 化Connexin 43蛋白抗體縮 98%
Connexin-45 間隙連接蛋白45抗體縮 ≥98%, FG
CXCR1/IL-8RA 表面趨化因子受體1抗體茴香烯 99%
CXCR2/CD182 表面趨化因子受體2抗體溶液 35 wt. % in H2O