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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-21 11:40:40瀏覽次數(shù)：607
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 20T |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X9607 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 公司產(chǎn)品僅供科研 | 英文名稱 | PCNA cell proliferation Detection Kit |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
PCNA cell proliferation Detection Kit | 20T | 1～3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹：
PCNA 細(xì)胞增殖檢測試劑盒（細(xì)胞免疫熒光法/流式細(xì)胞儀檢測），PCNA是細(xì)胞DNA 多聚酶的“δ"輔助蛋白，是真核細(xì)胞DNA 合成時(shí)所必需的一種酸性核蛋白。PCNA 在細(xì)胞核內(nèi)合成，并儲(chǔ)存在核內(nèi)，細(xì)胞處于靜止?fàn)顟B(tài)時(shí)，其含量很低，當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入增殖周期中，其表達(dá)明顯增加，故PCNA 的表達(dá)高低可反映細(xì)胞增殖的活躍程度。 操作方法 1. 在適的環(huán)境下培養(yǎng)細(xì)胞。 2. 除去培養(yǎng)液，用PBS 洗一次。 3. 胰蛋白酶處理和收集細(xì)胞，離心，（注意1）保證每管細(xì)胞數(shù)在106 個(gè)。 4. 用0.3 ml PBS 輕輕的重懸細(xì)胞, 然后慢慢加入0.7 ml 預(yù)冷的100%乙醇。用1 ml 玻璃移液管小心的混勻。在4°C 至少1h。（注意2） 5. 沉淀細(xì)胞，*吸去上清。 6. 用150 μl PBS/1 % BSA 洗細(xì)胞2 次。 7. 用100μl 抗體孵育液（0.5% Tween-20/1%BSA/PBS）重懸細(xì)胞，加入1ul PCNA 抗體(1μg/106 cells)，室溫孵育1 小時(shí)。 8. 離心收集細(xì)胞，用150μl1% BSA-PBS 洗2 次。 9. 離心收集細(xì)胞，用50μl 抗體孵育液重懸，加1μl (1.5μg/106 cells) 羊抗鼠IgG-FITC，室溫孵育30 分鐘。離心收集細(xì)胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次。 10. 用含有終濃度為10 μg/ml RNase A 和20μg/ml PI 的0.5 ml PBS（pH7.4）重懸細(xì)胞。 11. 避光使細(xì)胞在室溫下孵育20min 后，離心收集細(xì)胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次后，轉(zhuǎn)移至流式檢測管中重懸。 12. FACS 檢測或者儲(chǔ)存于4℃。 |
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測（1小時(shí)內(nèi)檢測）。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
載脂蛋白C4(APOC4)英文名稱：APOC4 ELISA Kit磷化B-Raf抗體包裝500g
載脂蛋白C3(APOC3)英文名稱：APOC3 ELISA Kit磷化癌易感基因1抗體包裝1g
載脂蛋白C1(APOC1)英文名稱：APOC1 ELISA Kit芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白樣1抗體包裝25g
載脂蛋白A4(APOA4)英文名稱：APOA4 ELISA Kit癌易感基因復(fù)合物亞基蛋白3抗體包裝5g
載脂蛋白A2(APOA2)英文名稱：APOA2 ELISA Kit腫瘤轉(zhuǎn)移抑制蛋白BAMBI抗體包裝1g
載脂蛋白A1(APOA1)英文名稱：APOA1 ELISA KitB淋巴淋巴瘤因子9抗體包裝5g
孕(Pg)英文名稱：Pg ELISA Kit膽綠還原抗體包裝1g
原肌球調(diào)節(jié)蛋白3(TMOD3)英文名稱：TMOD3 ELISA KitBIVM蛋白抗體包裝25g
原鈣黏15(PCDH15)英文名稱：PCDH15 ELISA Kit血型Lewis A抗原抗體包裝5g
誘導(dǎo)型一氧化氮合(NOS2)英文名稱：NOS2 ELISA Kit粘蛋白/巖藻糖基轉(zhuǎn)移3抗體包裝1g
硬脂酰去飽和(SCD)英文名稱：SCD ELISA KitBloom綜合征相關(guān)蛋白抗體包裝5g
硬骨(SOST)英文名稱：SOST ELISA Kit骨形態(tài)發(fā)生蛋白8b抗體包裝100g
胺2,3-雙加氧2(IDO2)英文名稱：IDO2 ELISA Kit磷化非受體性蛋白酪激ETK抗體包裝1g
胺2,3-雙加氧(IDO)英文名稱：IDO ELISA Kit磷化促凋亡調(diào)節(jié)蛋白BNIP3抗體包裝250mg
抑制結(jié)合蛋白(INHBP)英文名稱：INHBP ELISA KitB淋巴特異性激活OCT結(jié)合蛋白1抗體包裝25g
整合樣金屬蛋白與凝血樣3蛋白抗體白介21(IL21)Alectinib (CH5424802; RO5424802; AF802) 是一種有效，選擇性和口服的 ALK 抑制劑，其 IC50 為 1.9 nM，Kd
PCNA細(xì)胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)傘枝犁頭霉 2-氟-4-甲神經(jīng)營養(yǎng)因子3檢測試劑盒
灰褐鏈霉 N-Boc-4-酮-3-甲酸甲酯神經(jīng)營養(yǎng)因子4檢測試劑盒
枯草芽孢桿 5-基-2-氟苯甲神經(jīng)元特異性烯化酶檢測試劑盒
線團(tuán)擬諾卡氏 3-氯-4-氟苯甲蛋白檢測試劑盒
成晶節(jié)桿 二乙氨基乙縮二甲腎上腺素檢測試劑盒
Phoma medicaginis var. medicaginis 4-溴-3-羥基吡啶腎上腺素能a1A受體檢測試劑盒
腐皮鐮孢馬特變種 2-(N-Boc-4-基)乙腎上腺髓質(zhì)素檢測試劑盒
熱球狀尿素芽孢桿 吡啶-3-磺酰氯腎上腺髓質(zhì)素原檢測試劑盒
化妝品檢測用金黃色葡萄球 十五碳二元酸腎素檢測試劑盒
熱吸水鏈霉 氯代二碳鎓六氟磷酸鹽腎損傷因子1檢測試劑盒
釀酒酵母 間苯二酸二甲酯腎小球足裂隙膜蛋白檢測試劑盒
豬丹絲 4-溴-2-氯-6-氟苯酚生存素檢測試劑盒
橄欖灰鏈霉 3-氨基-6-氯吡-2-甲酸甲酯生長分化因子11檢測試劑盒
鏈霉 3,4-二氟苯磺酰氯生長分化因子15檢測試劑盒
副豬嗜血桿 2,6-二氟-4-溴苯生長分化因子3檢測試劑盒
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