以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
L-Hisidine是嬰兒必需的氨基酸。L-Hisidine是線粒體谷氨酰胺轉(zhuǎn)運(yùn)的抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):71-00-1 純度:99.94% 分子量:155.15 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
釀酒酵母單跨膜蛋白FOXRED1抗體Human AAGAB (Alpha- and gamma-adaptin-binding protein p34) ELISA KIT綿羊彈性蛋白2,中性粒(ELA2)免疫試劑盒
淺紫灰鏈霉菌淺紫灰亞種FOXRED2蛋白抗體Human AGPS (Alkyldihydroxyacetonephosphate synthase, peroxisomal) ELISA KIT綿羊催產(chǎn)(OT)免疫試劑盒
釀酒酵母巖藻糖1磷鳥(niǎo)苷酰轉(zhuǎn)移抗體Human ADRB2 (Beta-2 adrenergic receptor) ELISA KIT綿羊雌二(E2)免疫試劑盒
雷斯青霉外基質(zhì)蛋白FREM1抗體Human ALMS1 (Alstrom syndrome protein 1) ELISA KIT綿羊成纖維生長(zhǎng)因子23(FGF23)免疫試劑盒
芽胞桿菌 (蠟狀芽胞桿菌)原癌基因FRAT1抗體Human ADRA1D (Alpha-1D adrenergic receptor) ELISA KIT綿羊補(bǔ)體片段3b受體(C3bR)免疫試劑盒
黑曲霉叉頭蛋白D1抗體Human AMER1 (APC membrane recruitment protein 1) ELISA KIT綿羊補(bǔ)體片段3a(C3a)免疫試劑盒
長(zhǎng)柔毛栓孔菌11重鏈抗體Human AMBN (Ameloblastin) ELISA KIT綿羊白介8(IL-8/CXCL8)免疫試劑盒
謝瓦曲霉12輕鏈抗體Human APCDD1 (Protein APCDD1) ELISA KIT綿羊白介6(IL-6)免疫試劑盒
表皮葡萄球菌FLAG Tag標(biāo)簽抗體(C端)Human ADRB1 (Beta-1 adrenergic receptor) ELISA KIT綿羊白介4(IL-4)免疫試劑盒
苛求芽胞桿菌補(bǔ)體因子I重鏈抗體Human SPAG9(C-Jun-amino-terminal kinase-interacting protein 4) ELISA Kit綿羊白介2受體(IL-2R)免疫試劑盒
煙管菌8/第八/第八因子相關(guān)抗原輕鏈抗體Human ADAR (Double-stranded RNA-specific adenosine deaminase) ELISA KIT綿羊白介2(IL-2)免疫試劑盒
節(jié)桿菌磷化叉頭蛋白4抗體Human STC2(Stanniocalcin-2) ELISA Kit綿羊白介1β(IL-1β)免疫試劑盒
青霉磷化叉頭蛋白4抗體Human ADCY9 (Adenylate cyclase type 9) ELISA KIT綿羊白介1α(IL-1α)免疫試劑盒
普利茅斯沙雷氏菌甲基肽受體1抗體Human AHCYL1 (Adenosylhomocysteinase 2) ELISA KIT綿羊白介13(IL-13)免疫試劑盒
甲型副門氏菌磷化粘著斑激抗體Human ADSL(Adenylosuccinate lyase) ELISA Kit綿羊白介12(IL-12)免疫試劑盒
窄食單胞菌FUT5抗體Human AHCYL2 (Adenosylhomocysteinase 3) ELISA KIT綿羊白介10(IL-10)免疫試劑盒
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC,>99%(GC)醋辛酯
鹽海桿狀菌Marinobacter│salsuginis 質(zhì)量規(guī)格:Standard for GC, ≥99.5% (GC)蟲(chóng)草
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:standard for GC,≥99.5%(GC)補(bǔ)骨脂二氫黃
線粒體谷氨酰胺轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑(L-Hisidine)維A;(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Catharanthine sulfate多巴受體D2抗體包裝5g
維E煙酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Catharanthine sulfate多巴受體D1抗體包裝100ml
(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Combretastatin A4 多巴受體相互作用蛋白1抗體包裝25ml
維生A醋酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Oxytetracycline凋亡相關(guān)蛋白激1抗體包裝5ml
維生B1(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Oxytetracycline凋亡相關(guān)蛋白激2抗體包裝1g
維生B12(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Chrysin多巴、cAMP調(diào)節(jié)磷蛋白抗體包裝500mg
維生B3(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Chrysin磷化多巴/cAMP調(diào)節(jié)神經(jīng)磷蛋白抗體包裝100g
維生B6(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Formononetin磷化多巴/cAMP調(diào)節(jié)磷蛋白抗體包裝25g
維生C(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Formononetin磷化雙皮質(zhì)抗體包裝25g
維生C鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Daidzein磷化Disabled 1抗體包裝5g
維生K3,萘醌(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Daidzein磷化Disabled 1抗體包裝1g
萎銹靈(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: D(-)-allo-Threonine磷化Disabled 1抗體包裝5g
肟菌酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Deoxycorticosterone acetate 雙皮質(zhì)抗體包裝25g
烏拉地爾(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Deoxycorticosterone acetate D酪激衰減蛋白2抗體包裝5g
烏拉地爾雜質(zhì)A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tetrahydro-L-Biopterin (dihydrochloride)磷化D酪激衰減蛋白2抗體包裝25g