產(chǎn)品屬性:
中文名稱:Toll樣受體(TLRs)抑制劑
英文名稱:E6446 dihydrochloride
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
E6446是Toll樣受體(TLRs)抑制劑,HEK:TLR9細(xì)胞中IC50值為10nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1345675-25-3 別名:E-6446 dihydrochloride 純度:99.44% 分子量:522.51 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
貝倫格葡萄座腔菌癌易感基因2相關(guān)蛋白抗體Human FOXJ3 ELISA Kit豚鼠抗利尿激/血管加壓/精加壓(ADH/VP/AVP)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌磷化癌易感基因1抗體Human FOXO6 ELISA Kit豚鼠巨噬移動(dòng)抑制因子(MIF)免疫試劑盒
微黃漢納酵母磷化癌易感基因1抗體Human FOXJ3 ELISA Kit豚鼠巨噬集落激因子(M-CSF)免疫試劑盒
豬丹絲菌磷化上皮鈣粘附分子抗體Human FOXH1 ELISA Kit豚鼠降鈣基因相關(guān)肽(CGRP)免疫試劑盒
硬結(jié)節(jié)桿菌磷化癌易感基因1抗體Human FOXP1 ELISA Kit豚鼠基質(zhì)金屬蛋白抑制因子1(TIMP-1)免疫試劑盒
大腸桿菌屬BRD2蛋白抗體Human FOXO4 ELISA Kit豚鼠基質(zhì)金屬蛋白9(MMP-9)免疫試劑盒
pcDNA6/V5-His ABRD3蛋白抗體Human FOXL2 ELISA Kit豚鼠黃體激(LH)免疫試劑盒
叢花青霉磷化酪蛋白激6/腫瘤激抗體Human FOXO6 ELISA Kit豚鼠環(huán)磷腺苷(cAMP)免疫試劑盒
棉花新鞘菌磷化蛋白酪激ATK抗體Human FOXP1 ELISA Kit豚鼠環(huán)磷鳥(niǎo)苷(cGMP)免疫試劑盒
多主葡萄殼菌磷化EGF應(yīng)答因子1抗體Human FOXP2 ELISA Kit豚鼠過(guò)氧化脂質(zhì)/乳過(guò)氧化物(LPO)免疫試劑盒
短密青霉β抗體Human FNTB ELISA Kit豚鼠鉤端螺旋體IgG(Leptospira)免疫試劑盒
黑曲霉磷化BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體Human FOSL2 ELISA Kit豚鼠肝生長(zhǎng)因子(HGF)免疫試劑盒
香菇ARF鳥(niǎo)苷交換因子BIG1抗體Human FN3K ELISA Kit豚鼠甘油-3-磷脫氫(GAPDH)免疫試劑盒
黑曲霉腦特異性同源蛋白BSX抗體Human FIP1L1 ELISA Kit豚鼠干因子/肥大生長(zhǎng)因子(SCF/MGF)免疫試劑盒
釀酒酵母鋅指蛋白47抗體Human FIGNL1 ELISA Kit豚鼠鈣調(diào)(CAM)免疫試劑盒
梨輪紋病菌?BTBD14A蛋白抗體Human FIS1 ELISA Kit豚鼠端粒(TE)免疫試劑盒
多殺性巴氏桿菌Pasteurella│multocida 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRα2抗纖溶試劑盒去氧穿心蓮內(nèi)酯
苜蓿中華根瘤菌Sinorhizobium│meliloti 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRα2巨球蛋白試劑盒羥基芫花
絲核菌屬Rhizoctonia│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BRα2-HS糖蛋白試劑盒7-羥基馬兜鈴A
Toll樣受體(TLRs)抑制劑自然銅(醋煅)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Apraclonidine hydrochloride神經(jīng)組織特異性F肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體包裝5g
棕櫚(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tazarotene胞內(nèi)活化的Notch1蛋白抗體包裝100g
棕矢車(chē)菊(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tazarotene神經(jīng)鈣傳感蛋白1抗體包裝25g
走馬胎(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ganoderic acid D神經(jīng)元鈣結(jié)合相關(guān)蛋白EFCBP1抗體包裝5g
祖師麻(唐古特瑞香)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Levoceitrizine HCl膜相關(guān)蛋白樣蛋白NUMBL抗體包裝1g
鉆山風(fēng)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Levoceitrizine HCl嘌呤霉敏感性肽蛋白抗體包裝5g
醉椒英文名稱: Cetirizine HydrochlorideN-乙基順二酰亞敏感融合蛋白抗體包裝100mg
醉魚(yú)草皂苷IVb(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ramosetron hydrochlorideNIPAL2蛋白抗體包裝10mg
多巴(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Etodolac神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子HNT抗體包裝25mg
樟腦(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Amfebutamone Hydrochloride軸突蛋白1β/Neurexin 1β抗體包裝25g
端羥基聚(乳-羥基乙75/25)共聚物(重均分子量...英文名稱: rosiglitazone hydrochloride谷受體3A抗體包裝5g
端羥基聚乳乙共聚物50/50(重均分子量0.5-...英文名稱: BENZBROMARONE谷受體3B抗體包裝1g
端羥基外消旋聚乳(重均分子量0.5-1.5萬(wàn))英文名稱: Butenafine HCl谷受體3A+3B抗體包裝5g
端羥基外消旋聚乳(重均分子量1.5-3萬(wàn))英文名稱: Tropisetron hydrochlorideP53誘導(dǎo)凋亡抑制蛋白α抗體包裝1g
端羥基外消旋聚乳(重均分子量109-150萬(wàn))英文名稱: Tropisetron hydrochloride胞質(zhì)5'核苷1A抗體包裝250mg
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)