以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
Lopinavir是高親和性HIV蛋白酶抑制劑,Ki為1.3pM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):192725-17-0 別名:ABT-378 純度:99.58% 分子量:628.8 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
粉被馬利婭霉幾丁質(zhì)3樣蛋白3抗體Human EFHD1 ELISA Kit兔尿激型纖溶原激活物(uPA)免疫試劑盒
副豬嗜血桿菌趨化樣因子超家族成員2抗體Human EIF3C ELISA Kit兔內(nèi)皮型一氧化氮合成(eNOS)免疫試劑盒
貝倫格葡萄座腔菌趨化樣因子超家族成員2亞型1抗體Human EFTUD1 ELISA Kit兔末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)免疫試劑盒
芽孢桿菌18號(hào)染色體開放閱讀框1抗體Human EFS ELISA Kit兔淋巴功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)免疫試劑盒
檸檬桿菌色c氧化VIIA亞型2抗體Human EFTUD2 ELISA Kit兔粒集落激因子(G-CSF)免疫試劑盒
黃曲霉鈣離子通道a1F亞型抗體Human EFHA1 ELISA Kit兔可溶性凋亡相關(guān)因子(sFAS/Apo-1)免疫試劑盒
黃粘蓋牛肝菌鈣調(diào)磷B亞基B1抗體Human EFHC1 ELISA Kit兔抗糖蛋白抗體(GP)免疫試劑盒
宇佐美曲霉鈣調(diào)蛋白激激α抗體CaMKKαHuman EIF1 ELISA Kit兔抗平滑肌抗體(ASMA) 免疫試劑盒
彎孢菌環(huán)腺苷應(yīng)答元件結(jié)合蛋白H抗體Human EFHD1 ELISA Kit兔抗凝血III(SERPINC1)免疫試劑盒
雜色曲霉磷化周期檢測(cè)點(diǎn)激1抗體Human EFS ELISA Kit兔抗腦組織抗體(ABAb)免疫試劑盒
肺形側(cè)耳鈣激活蛋白12抗體Human Eg5 ELISA Kit兔抗內(nèi)皮抗體(AECA)免疫試劑盒
Au141(黑木耳)20號(hào)染色體開放閱讀框134抗體Human EFTUD2 ELISA Kit兔抗單核抗體(AMA)免疫試劑盒
廣食黃桿菌B粘附分子CD239抗體Human EHBP1 ELISA Kit兔膠原吡啶交聯(lián)(PYD)免疫試劑盒
聚生殼菌胰羧肽B2抗體Human EHD1 ELISA Kit兔降鈣原(PCT)免疫試劑盒
草假單胞菌視網(wǎng)膜色變性蛋白26抗體Human EFTUD1 ELISA Kit兔降鈣基因相關(guān)肽(CGRP)免疫試劑盒
松口蘑過(guò)氧化物體肉堿酰基轉(zhuǎn)移抗體Human EFHA1 ELISA Kit兔甲狀旁腺激(PTH)免疫試劑盒
新城疫病毒Rubulavirus│Newcastle disease virus 質(zhì)量規(guī)格:Al2O3>90%,BCS100鈣結(jié)合蛋白A9/鈣粒蛋白B試劑盒律草
凝結(jié)芽孢桿菌Bacillus│coagulans 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRS100鈣結(jié)合蛋白A8/鈣粒蛋白A試劑盒龍膽
青霉Penicillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià):>900 u/mgS100鈣結(jié)合蛋白A8/A9復(fù)合物試劑盒藜蘆
HIV蛋白酶抑制劑(Lopinavir)富馬英文名稱: β-Amyloid (25-35)神經(jīng)母瘤蛋白PHOX2B抗體包裝100g
富馬盧帕他定英文名稱: β-MSH, human周期蛋白依賴性激5激活因子1抗體包裝25g
富馬馬斯汀英文名稱: β-MSH, monkey肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白2/3復(fù)合體亞基5抗體包裝1g
富馬替芬英文名稱: Ac-PACAP-38 (human, mouse,ovine, porcine, rat)浦肯野相關(guān)蛋白1抗體包裝5g
富馬伊布利特英文名稱: Ac-YVAD-pNA凋亡誘導(dǎo)受體PLEKHG5抗體包裝500g
枸櫞莫沙比利英文名稱: ACTH (1-10), human蛋白質(zhì)磷2A-B55抗體包裝100mg
枸櫞噴托維林/托可拉斯/妥克拉司英文名稱: ACTH (1-13), human棕櫚酰蛋白解2抗體包裝1g
枸櫞奧芬那君;枸芬那君英文名稱: ACTH (1-16), human多谷酰結(jié)合蛋白1抗體包裝250mg
骨化二英文名稱: ACTH (1-17), human豬藍(lán)耳病病抗體包裝1g
骨化三英文名稱: ACTH (1-24), human對(duì)氧磷3抗體包裝25g
琥珀多西拉敏英文名稱: ACTH(1-39),human蛋白質(zhì)精亞型2抗體包裝5g
琥珀舒馬曲普坦英文名稱: ACTH (1-39), rat磷乙轉(zhuǎn)移2抗體包裝10ml
華法林英文名稱: ACTH (18-39), human磷脂酰肌結(jié)合網(wǎng)格蛋白組裝蛋白抗體包裝50ml
華法林鈉英文名稱: ACTH (4-10), human絲/蘇蛋白磷1調(diào)節(jié)亞基10抗體包裝1g
環(huán)扎林鹽鹽英文名稱: Adrenomedullin (22-52),human色氧化裝配因子PET112抗體包裝25g