以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
APY0201是一種有效的PIKfyve抑制劑,抑制PtdIns3P轉(zhuǎn)化為PtdIns(3,5)P2,IC50為5.2nM。APY0201還抑制IL-12/23產(chǎn)生。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1232221-74-7 純度:98.56% 分子量:413.48 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
假黃單胞菌屬癌胚抗原單克抗體(檢測)Human CREB3L2 ELISA Kit山羊腦啡肽(ENK)免疫試劑盒
凍土毛霉癌基因c-Raf抗體Human CREST ELISA Kit山羊免疫球蛋白M(IgM)免疫試劑盒
兩歧雙歧桿菌Ⅲ型膠原蛋白/膠原蛋白3/3型膠原蛋白抗體Human CREB1 ELISA Kit山羊免疫球蛋白G(IgG)免疫試劑盒
球形節(jié)桿菌黑色瘤相關(guān)抗原抗體Human Claudin 7 ELISA Kit山羊免疫球蛋白A(IgA)免疫試劑盒
黃孢紫紅菇CD33抗體Human CREB3L2 ELISA Kit山羊粒巨噬集落激因子(GM-CSF)免疫試劑盒
希瓦氏菌*睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子受體α抗體Human CD81(CD81 antigen) ELISA Kit山羊口蹄疫抗體(FMDV IgM)免疫試劑盒
釀酒酵母CD7抗體Human CKS2 ELISA Kit山羊(Cortisone)免疫試劑盒
果生鏈核盤菌尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子2抗體Human CEP44 ELISA Kit山羊抗利尿激/血管加壓/精加壓(ADH/VP/AVP)免疫試劑盒
短芽孢桿菌CD68抗體Human CEP55 ELISA Kit山羊結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)免疫試劑盒
東方伊薩酵母緊密連接蛋白1抗體Human CD94 ELISA Kit山羊堿性成纖維生長因子(bFGF)免疫試劑盒
尖孢鐮刀菌膜輔蛋白抗體Human CD9(CD9 antigen) ELISA Kit山羊甲狀腺(T4)免疫試劑盒
委內(nèi)瑞拉鏈霉菌CXC趨化因子16抗體Human CEP63 ELISA Kit山羊甲狀旁腺激(PTH)免疫試劑盒
新疆鹽地桿菌色c氧化IV亞型1抗體Human CEP350 ELISA Kit山羊黃體生成(LH)免疫試劑盒
球孢枝孢1號染色體開放閱讀框227抗體Human CDC14B ELISA Kit山羊氧化(XOD)免疫試劑盒
蘇云金芽孢桿菌2號染色體開放閱讀框71抗體Human CD81(CD81 antigen) ELISA Kit山羊還原型谷胱甘肽(GSH)免疫試劑盒
淡青鏈霉菌質(zhì)膜微囊蛋白-1抗體Human CEP44 ELISA Kit山羊過氧化氫(CAT)免疫試劑盒
酵母菌Saccharomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRp物質(zhì)試劑盒雷公藤次堿
木霉Trichoderma│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRP鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白試劑盒羅漢松樹脂酚
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRProminin 2試劑盒雷公藤定堿
PIKfyve抑制劑(APY0201)馬來阿扎他啶英文名稱: LHRH (4-10)磷變位1抗體包裝1g
馬來非尼拉敏英文名稱: Lymphocyte Activating Pentapeptide磷激1抗體包裝5g
馬來吡汀英文名稱: Melittin(Mellitin)羧化抗體包裝1g
馬來伏沙明英文名稱: Metamorphosin A脫氫復(fù)合物X蛋白抗體包裝5g
馬來那敏/撲爾敏英文名稱: Neo-Kyotorphin磷烯羧激抗體包裝100g
馬來溴那敏英文名稱: Neurokinin A (4-10)果糖-2,6-二磷1抗體包裝25g
嗎貝英文名稱: Neuropeptide W-30 (human)磷化6磷果糖激抗體包裝1g
美芬諾英文名稱: Neuropeptide W-30 (rat)p21蛋白抗體包裝5g
英文名稱: Neurotensin (1-8)P選擇糖蛋白配體1抗體包裝25g
孟魯司特鈉英文名稱: Neuropeptide Y (13-36)(porcine)絲蛋白2抗體包裝5g
米爾貝肟英文名稱: Neuropeptide Y (2-36) (human,rat)蛋白調(diào)解因子10抗體包裝10g
米拉貝英文名稱: Neuropeptide Y (22-36)香葉烯基轉(zhuǎn)移1β抗體包裝1g
米屈肼英文名稱: Neuropeptide Y (3-36)(porcine)胞漿蛋白LCP1抗體包裝100g
莫吉司坦英文名稱: Osteocalcin (7-19) (human)黑色瘤優(yōu)先表達(dá)抗原抗體包裝25g
奈福泮/鹽平痛新英文名稱: Osteogenic Growth Peptide原鈣粘蛋白γA6抗體包裝5g