Hoechst33342/PI細(xì)胞凋亡染色試劑盒公司*的產(chǎn)品：thrombin II 凝血Ⅱ抗體對(duì)-β-D-吡喃半乳糖苷 98%
phospho-p38MAPK/MAPK14 (pThr180/pTyr182) 化p38MAPK抗體4--β-D-吡喃葡萄糖苷 98%
Tie1 血管生成受體1抗體4--2-酰氨-2-脫氧-β-D-吡喃葡萄糖苷 98%
Thy-1/CD90 CD90抗體

產(chǎn)品屬性：

中文名稱：Hoechst33342/PI細(xì)胞凋亡染色試劑盒

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100T

發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研

商品介紹：

細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面：

細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：

①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究；

②生物膜與細(xì)胞器的研究；

③細(xì)胞骨架體系的研究；

④細(xì)胞增殖及其調(diào)控；

⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控；

⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；

⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化；

⑧細(xì)胞工程.

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

糯稻根（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Chlortoluron solutionG蛋白偶聯(lián)受體115抗體包裝1g

歐當(dāng)歸內(nèi)酯A（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： DiuronG蛋白偶聯(lián)受體10抗體包裝5g

歐夾竹桃苷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Clofentezineβ-葡萄糖腦苷脂抗體包裝1g

歐前胡（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Fenuron半乳糖凝集相關(guān)蛋白A抗體包裝250mg

藕節(jié)（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Daminozide半乳糖凝集12抗體包裝5g

盤龍參（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： DEETγ基丁運(yùn)載蛋白3抗體包裝100g

螃蟹（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： TerbumetonGTPIMAP家族成員1抗體包裝25g

胖大海（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： ThifluzamideGTPIMAP家族成員2抗體包裝5g

佩蘭（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： TsumacideGTPIMAP家族成員3抗體包裝1g

蟛蜞菊內(nèi)脂;蟛蜞菊內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： TerbuthylazineGTPIMAP家族成員4抗體包裝5g

披麻草（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Tri-tert-butylphosphineGTPIMAP家族成員5抗體包裝25g

枇杷葉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： TebufenpyradG蛋白調(diào)節(jié)誘導(dǎo)神經(jīng)突增生蛋白2抗體包裝5g

片姜黃（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： 1-NaphthaleneacetamideGTPIMAP家族成員7抗體包裝1g

平貝母（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： ThiaclopridGTPIMAP家族成員8抗體包裝25g

坡模-28-O-β-D-吡喃葡萄糖酯英文名稱： Tricyclazol solutionG蛋白調(diào)節(jié)誘導(dǎo)神經(jīng)突增生蛋白1抗體包裝5g

細(xì)腳擬青霉Paecilomyces tenuipes 質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品牛小腸堿性磷試劑盒沒食子酯;Propyl gallat

白靈菇Pleurotus│nebrodensis 質(zhì)量規(guī)格：>98%牛奶過敏原特異性IgE抗體芒果苷;Mangiferin

鏈霉菌屬Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP34,BR,可用于培養(yǎng)牛兒基焦磷合試劑盒沒食子;Gallic acid
Hoechst33342/PI細(xì)胞凋亡染色試劑盒朱紅鏈霉 3-氯喹啉H1N1流感IgA抗體Elisa

煙曲霉 (R)-5-溴甲基-2-吡咯烷酮H1N1流感IgG抗體Elisa

越桔假絲酵母 反式-4-(4-基環(huán)己基)苯H1N1流感IgM抗體Elisa

巨孢毛霉 2-硝基-5-氯H3N2流感IgA抗體Elisa

兩型孢毛霉 2,4-二氯-5-甲氧基苯H3N2流感IgG抗體Elisa

扣囊復(fù)膜孢酵母 苯-2,5-二磺酸H3N2流感IgM抗體Elisa

黑曲霉 苯并呋喃-2-酸尿囊Elisa

大腸埃希 4-(Boc-氨基)吡啶半乳糖凝集3Elisa

枯草芽孢桿 BOC-D-3-(3-吡啶基)-氨酸嗅覺受體1J1Elisa

溜曲霉 2,6-二氯-4-吡啶奧曲肽Elisa

球孢白僵 Estradiol valerate整合α4β1Elisa

金針菇F5 2'-羥基苯酮羧肽A4Elisa

鼠李糖乳桿 替考拉寧酪氨酸蛋白激受體A4Elisa

膠囊青霉 4-羥基鄰苯二甲酸低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白4抗體Elisa

深紅酵母 N-BOC-3-氨基環(huán)己泛結(jié)合E2Elisa 

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)