商品介紹:
TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒是用來檢測(cè)細(xì)胞在凋亡過程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況, 其原理是生物素(Biotin)標(biāo)記的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以連接到凋亡細(xì)胞中斷裂DNA的3′-OH末端,并可與連接辣根過氧化酶的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)特異結(jié)合,在辣根過氧化酶底物二氨基聯(lián)(DAB)的存在下,產(chǎn)生很強(qiáng)的顏色反應(yīng)(呈深棕色),特異準(zhǔn)確地定位正在凋亡的細(xì)胞,因而在普通顯微鏡下即可觀察和計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞;由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂,因而沒有3′-OH形成,很少能夠被染色。 二、試劑盒組份 組份 Cat:KFS433 儲(chǔ)存條件 Biotin-11-dUTP 20μl -20℃,避光,12個(gè)月 儲(chǔ)存條件:-20℃避光,有效期12個(gè)月 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
酚酞(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Levothyroxine Sodium 表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白2抗體包裝1g
(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lidocaine肉堿棕櫚?;D(zhuǎn)移2抗體包裝5g
夫拉扎勃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lidocaine肉堿氧位基轉(zhuǎn)移抗體包裝100g
夫西地(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lidocaine HClIV型膠原α3結(jié)合蛋白抗體包裝25g
夫西地鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lidocaine HCl肉堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移1B抗體包裝5g
呋喃雜質(zhì)A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lisinopril Dihydrate膽固27α羥化抗體包裝25g
呋喃妥因(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lisinopril Dihydrate膽固24α7羥化抗體包裝5g
呋喃西林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lobeline Hydrochloride色P450 4A1抗體包裝25g
呋喃唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lonidamine色P4504A22抗體(脂肪Ω羥化)包裝5g
呋塞米(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lopinavir周期蛋白依賴性激抑制劑2D抗體包裝1g
伏格列波糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Lopinavir膽固24S-羥化包裝5g
伏格列波糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Loratadine豬瘟病抗體包裝100g
伏立康唑(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Loratadine色c氧化亞型2抗體包裝25g
伏立諾他(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Melatonine周期G2抗體包裝5g
胞嘧啶/5-胞嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Melatonine銅藍(lán)蛋白抗體包裝1g
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品信號(hào)識(shí)別顆??贵w試劑盒偽原薯蕷皂苷;Pseudoprotodi
黃曲霉Aspergillus│flavus 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%,BR信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子6試劑盒王不留行黃苷;Vaccarin
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品信號(hào)傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5試劑盒烏藥環(huán)戊烯二;Methyllind
生物素標(biāo)記dUTP溶液(0.25mM)金黃殼囊孢 Gly-Phe-Asp-Leu-Asn-Gly-Gly-Gly-Val-Gly熱休克蛋白aElisa
海角副球 2-乙絲氨酸肽抑制因子Kazal型1Elisa
擬莖點(diǎn)霉 5-硝基-2,3-二氯吡啶氧化應(yīng)激反應(yīng)誘導(dǎo)凋亡蛋白Elisa
平田頭菇 5-硝基-2-羥基-3-氯吡啶唾液淀粉Elisa
廣島鏈霉 Olaparib (AZD2281, Ku-0059436)天青殺;肝結(jié)合蛋白Elisa
硬結(jié)節(jié)桿 1-苊酮核酸外切Elisa
果生鏈核盤 4-溴-3-氟芐ATP合6Elisa
異常漢遜酵母變種 3-氟-4-吡啶Trim22分子Elisa
芬娜冬菇 反式-4-甲氧基查耳酮Trim41分子Elisa
枯草芽胞桿枯草亞種 硬脂酸鎘Trim5分子Elisa
特異青霉(產(chǎn)黃青霉) 甲亢平前列腺E代謝物Elisa
血痕韌革 Cyprosulfamide纖維源性蛋白Elisa
鹽古桿 4-苯氧基二氫還原Elisa
高盧蜜環(huán) 1-甲基-3-苯基絲氨酸;蘇氨酸蛋白激1Elisa
球孢白僵 2-[[2-(二甲氨基)乙基]甲氨基]乙二酰Elisa