公司產(chǎn)品僅用于科研
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進化;
⑧細(xì)胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:kFluor647-EdU法細(xì)胞增殖檢測試劑盒(流式)
英文名稱:
產(chǎn)品規(guī)格:20T|10T|50T
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
細(xì)胞增殖檢測是評估細(xì)胞健康程度、遺傳毒性及抗腫瘤藥物效果的基礎(chǔ)實驗手段。精確的檢測細(xì)胞增殖方法是BrdU法。EdU法檢測試劑盒是brdu方法的革命性突破。EdU(5-溴-2-脫氧尿嘧啶)試劑盒是一種嘧啶類似物,可以在DNA合成期整合入DNA雙鏈。EdU法檢測是基于“點擊"反應(yīng),一種由銅催化的疊氮化合物和炔烴的原子共價反應(yīng)。 本試劑盒中,EdU試劑含有炔烴,而kFlour647染料試劑含有疊氮化合物。點擊法的EdU標(biāo)記增殖快速有效,易于使用。只需少量的疊氮化染料即可非常有效地標(biāo)記出整合的EdU。標(biāo)準(zhǔn)化的固定和去污劑促滲可以使檢測試劑進入細(xì)胞,而brdu方法則需要DNA變性(如酸變性、熱變性或者用Dnase消化)去暴露BrdU,從而方便BrdU抗體結(jié)合。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
E-鈣粘附分子(E-Cadherin)英文名稱:E-Cadherin ELISA Kit轉(zhuǎn)錄因子Brn3蛋白抗體Brn3α包裝5g
CXC趨化因子配體1(CXCL1)英文名稱:CXCL1 ELISA Kit骨形態(tài)發(fā)生蛋白6抗體包裝25g
CX3C趨化因子/fractalkine(FKN/CX3CL1)英文名稱:FKN/CX3CL1 ELISA Kit腦鈉抗體包裝5g
CD80分子(CD80/B7-1)英文名稱:CD80/B7-1 ELISA Kit骨形態(tài)發(fā)生蛋白3抗體包裝100g
CD30配體(sCD30 L)英文名稱:sCD30 L ELISA Kit抑凋亡基因bag1抗體包裝25g
B細(xì)胞活化因子(BAFF/CD257/TNFSF13B)英文名稱:BAFF/CD257/TNFSF13B ELISA Kit蛙皮受體3抗體包裝5g
10kDa干擾γ誘導(dǎo)蛋白(IP-10/CXCL10)英文名稱:IP-10/CXCL10 ELISA Kit骨形態(tài)發(fā)生蛋白8抗體包裝1g
10kDa干擾γ誘導(dǎo)蛋白(IP-10)英文名稱:IP-10 ELISA Kit骨形態(tài)發(fā)生蛋白6抗體包裝25g
左右決定因子2(LEFTY2)英文名稱:LEFTY2 ELISA Kit磷化Bcl-2抗體包裝5g
左右決定因子1(LEFTY1)英文名稱:LEFTY1 ELISA Kit磷化Bcl-2抗體包裝100g
組織因子通道抑制因子(TFPI)英文名稱:TFPI ELISA Kit磷化Bcl-xL蛋白抗體包裝25g
組織因子(TF)英文名稱:TF ELISA Kit神經(jīng)母瘤相關(guān)蛋白ARID3B抗體包裝5g
組織型纖溶原激活因子(tPA)英文名稱:tPA ELISA Kit微管蛋白β4抗體包裝1g
組織金屬蛋白抑制因子4(TIMP4)英文名稱:TIMP4 ELISA Kit霍亂腸β鏈抗體包裝5g
組織金屬蛋白抑制因子3(TIMP3)英文名稱:TIMP3 ELISA Kitβ晶體蛋白B1抗體包裝1g
AHNAK核蛋白2抗體干擾α16(IFNα16)LDN193189 是一種選擇性的 BMP I 型受體抑制劑,抑制 ALK2 和 ALK3 的 IC50 分別為 5 nM 和 30 nM。對 ALK4,ALK
kFluor647-EdU法細(xì)胞增殖檢測試劑盒(流式)芽枝狀枝孢 3-溴-2-氟苯甲葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白-78檢測試劑盒
賴氏毛殼 4-溴-1-萘甲酸葡萄糖氧化酶檢測試劑盒
鵝膏屬 亞甲基三苯基膦葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽檢測試劑盒
清酒乳桿清酒亞種* 原三乙酯葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1檢測試劑盒
匍枝根霉 2-氟-5-酸葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2檢測試劑盒
潮濕纖維單胞 1,1,2,2-四氟乙基-2,2,3,3-四氟基前白蛋白檢測試劑盒
黑木耳 亞甲基二磷酸四異酯前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶素9檢測試劑盒
溶厄氏 碳酸二(2-吡啶)酯前列環(huán)素檢測試劑盒
黑曲霉 2-吡啶基乙酸甲酯前列腺干抗原檢測試劑盒
多主葡萄殼 3-氯-5-硝苯前列腺素D2檢測試劑盒
盤孢屬 新特姆前列腺素E1檢測試劑盒
土曲霉原變種 2-溴甲基-4-基甲酯前列腺素E2檢測試劑盒
根瘤 4-甲基-3-庚, 赤式 +蘇式前列腺素F2α檢測試劑盒
淡紫灰鏈霉 3-正丁氧基前列腺素F2α受體檢測試劑盒
假絲酵母屬 四氫吡喃-4,4-二羧酸二甲酯前列腺酸性磷酸酶檢測試劑盒