以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
地塞米松(Dexamethasone),一種抗炎糖皮質(zhì)素,對細胞存活、細胞信號的轉(zhuǎn)導和基因表達具有一系列的影響,如:可抑制合酶的誘導作用(IC50=5 nM);可通過刺激Na+-K+泵增強大動脈平滑肌細胞陽離子的運輸作用;可降低周期蛋白A和Cdk2的活性;抑制骨細胞G1/S的過渡;抑制Rb蛋白的磷酸化作用;誘導人胸腺細胞凋亡發(fā)生。 本品為溶于DMSO的儲存液,濃度10mM。一般而言,500-1000nM 的地塞米松于37℃作用6h足可誘導凋亡發(fā)生。 中文別名:21α-乙酰氧基-9α-氟-11β,17α-二羥基-16α-甲基孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮 9α-氟-16α-甲基氫化潑 9-氟-11,17,21-三羥基-16-甲基(11b,16a)-孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮德沙美 英文別名:9α-Fluoro-16α-methylprednisolone,PrednisoloneF,(11β,16α)-9-Fluoro-11,17,21-trihydroxy-16-methylpregna-1,4-diene-3,20-dione,9α-Fluoro-16α-methyl-11β,17α,21-trihydroxy-1,4-pregnadiene-3,20-dione CAS:50-02-2 分子式:C22H29FO5 分子量:392.46 外觀:無色液體(10mM in DMSO) 儲存條件:-20℃ |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
醛脫氫9家族成員A1(ALDH9A1)英文名稱:ALDH9A1 ELISA Kit鈣離子通道a1F亞型抗體包裝500g
醛脫氫1家族成員A1(ALDH1A1)英文名稱:ALDH1A1 ELISA Kit鈣調(diào)磷B亞基B1抗體包裝100g
趨化因子C-X-C-基元受體4(CXCR4)英文名稱:CXCR4 ELISA Kit鈣調(diào)蛋白激激α抗體CaMKKα包裝25g
趨化因子C-X-C-基元受體3(CXCR3)英文名稱:CXCR3 ELISA Kit環(huán)腺苷應答元件結(jié)合蛋白H抗體包裝5g
趨化因子C-X-C-基元配體16(CXCL16)英文名稱:CXCL16 ELISA Kit磷化周期檢測點激1抗體包裝1g
趨化因子C-X3-C-基元受體1(CX3CR1)英文名稱:CX3CR1 ELISA Kit鈣激活蛋白12抗體包裝1g
趨化因子C-C-基元受體8(CCR8)英文名稱:CCR8 ELISA Kit20號染色體開放閱讀框134抗體包裝5g
趨化因子C-C-基元受體7(CCR7)英文名稱:CCR7 ELISA KitB粘附分子CD239抗體包裝100g
趨化因子C-C-基元受體1(CCR1)英文名稱:CCR1 ELISA Kit胰羧肽B2抗體包裝25g
趨化因子C-C-基元配體3樣蛋白1(CCL3L1)英文名稱:CCL3L1 ELISA Kit視網(wǎng)膜色變性蛋白26抗體包裝1g
趨化因子C-C-基元配體1(CCL1)英文名稱:CCL1 ELISA Kit過氧化物體肉堿酰基轉(zhuǎn)移抗體包裝25g
趨化(CHEM)英文名稱:CHEM ELISA Kit16號染色體開放閱讀框7抗體包裝5g
巰基硫轉(zhuǎn)移(MPST)英文名稱:MPST ELISA Kit16號染色體開放閱讀框57抗體包裝100mg
氫/鉀離子交換ATPβ肽(ATP4β)英文名稱:ATP4β ELISA Kit3號染色體開放閱讀框37抗體包裝1g
氫/鉀離子交換ATPα肽(ATP4α)英文名稱:ATP4α ELISA Kit3號染色體開放閱讀框49抗體包裝250mg
熱帶醋桿菌Acetobacter tropicalis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品腫瘤相關抗原試劑盒棕櫚;Palmitic acid
夏威夷鏈霉菌Streptomyces│hawaiiensis 質(zhì)量規(guī)格:純度>99,USP腫瘤特異生長因子/腫瘤相關因子試劑盒芝麻林;Sesamolin
生態(tài)館硝鹽還原菌Nitratireductor│aquibiodomus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標準品腫瘤壞死因子誘導基因6蛋白試劑盒 ;Levodopa
地塞米松溶液(10mM in DMSO)樹生黃單胞 反式-1,4-環(huán)己烷二甲酸單甲酯血小板活化因子Elisa
海洋桿 2-氯-4-氟肉桂酸血小板活化因子乙酰水解Elisa
美登木糖霉 3-三氟甲氧基苯肼鹽酸鹽血小板抗體IgG;M;AElisa
芽胞桿 正丁基二酸二乙酯血小板膜糖蛋白ⅠbⅨαElisa
釀酒酵母 髓鞘藍 38血小板膜糖蛋白Ⅱb;ⅢaElisa
高加索球孢鏈霉 4-苯甲血小板膜糖蛋白Ⅱb;Ⅲa抗體Elisa
中間氣單胞 烷二甲硫絡合物血小板內(nèi)皮粘附分子1Elisa
運動節(jié)桿 N,N-二乙苯烷復合物血小板相關抗體IgMElisa
根霉屬 (S)-Α-甲基-4-硝基芐鹽酸鹽血小板衍化生長因子BElisa
大腸埃希氏桿 (4-甲氧基芐基)甲血小板衍化生長因子BBElisa
粉被馬利婭霉 顏料綠 7血小板衍生生長因子α受體Elisa
副豬嗜血桿 1-萘乙血小板衍生生長因子β受體Elisa
貝倫格葡萄座腔 2-氯-4-硝基三氟甲苯血小板衍生生長因子受體Elisa
芽孢桿 聚合氯化鋁血小板衍生生長因子Elisa
檸檬酸桿 3,5-二氟苯基乙酸血小板源性生長因子DElisa