公司產(chǎn)品僅用于科研
細胞生物學研究有以下幾個方面:
細胞生物學的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細胞核、染色體以及基因表達的研究;
②生物膜與細胞器的研究;
③細胞骨架體系的研究;
④細胞增殖及其調(diào)控;
⑤細胞分化及其調(diào)控;
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細胞的起源與進化;
⑧細胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:Caspase 3活性檢測試劑盒(比色法)
英文名稱:Caspase 3 Assay Kit, Colorimetric
產(chǎn)品規(guī)格:20T
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
Caspase 3,即Cysteine-requiring Aspartate Protease 3,也稱CPP32、Yama或apopain,屬于Caspase家族的CED-3亞家族(CED-3 subfamily),系一種在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶,也是哺乳動物細胞中研究多的一個Caspase。 Caspase 3可以剪切procaspase 3、6、7和9,且可以直接特異性剪切多種Caspase底物,包括PARP(poly(ADP-ribose)polymerase)、ICAD(Inhibitor of caspase-activated deoxyribonuclease)、gelsolin和fodrin等。這些由Caspase 3介導的蛋白剪切是細胞凋亡分子機制的重要組成部分。另外,caspase 3在細胞核凋亡和細胞起泡(Cell blebbing)過程中也起到了關(guān)鍵作用,包括染色質(zhì)固縮(chromatin condensention),DNA片段化(DNA fragmentation)等。 Caspase 3 Assay Kit, Colorimetric是一款簡單快速檢測細胞或組織內(nèi)Casepase 3活性的試劑盒,其檢測原理是基于Casepase 3可以催化底物Ac-DEVD-pNA(acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide)產(chǎn)生黃色的pNA(p-nitroaniline),pNA在405nm附近有強吸收,從而可以通過測定吸光度來檢測Caspase 3的活性(黃色產(chǎn)物與Caspase 3酶的活性成正比)。 另外,本試劑盒中還提供了Caspase 3催化產(chǎn)生的黃色產(chǎn)物pNA,以此作為定量caspase 3酶活性的標準品。 試劑盒組份: Lysis Buffer裂解液————8ml Assay Buffer檢測緩沖液——8ml Ac-DEVD-pNA(2mM)—————200μl pNA(10mM)————————200μl 儲存條件:-20℃ |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
溶血卵磷脂?;D(zhuǎn)移3(LPCAT3)英文名稱:LPCAT3 ELISA Kit貓眼綜合征染色體候選基因6抗體包裝25g
溶血卵磷脂酰基轉(zhuǎn)移2(LPCAT2)英文名稱:LPCAT2 ELISA Kit21號染色體開放閱讀框2抗體包裝25mg
溶血卵磷脂?;D(zhuǎn)移1(LPCAT1)英文名稱:LPCAT1 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框86抗體包裝25G
溶血磷脂受體3(LPAR3)英文名稱:LPAR3 ELISA Kit21號染色體開放閱讀框128抗體包裝5G
溶體性磷2(ACP2)英文名稱:ACP2 ELISA Kit6號染色體開放閱讀框62抗體包裝100g
妊娠關(guān)聯(lián)血漿蛋白A(PAPPA)英文名稱:PAPPA ELISA KitCCZ1蛋白抗體包裝500g
熱休克轉(zhuǎn)錄因子4(HSF4)英文名稱:HSF4 ELISA Kit腦蛋白5抗體包裝1g
熱休克轉(zhuǎn)錄因子1(HSF1)英文名稱:HSF1 ELISA Kit21號染色體開放閱讀框58抗體包裝5g
熱休克蛋白β8(HSPβ8)英文名稱:HSPβ8 ELISA Kit20號染色體開放閱讀框43抗體包裝1g
熱休克蛋白β6(HSPβ6)英文名稱:HSPβ6 ELISA Kit9號染色體開放閱讀框43抗體包裝5g
熱休克蛋白β2(HSPβ2)英文名稱:HSPβ2 ELISA Kit幾丁質(zhì)3樣蛋白3抗體包裝100ml
熱休克蛋白40(HSP40)英文名稱:HSP40 ELISA Kit趨化樣因子超家族成員2抗體包裝500ml
染色質(zhì)裝配因子1亞基B(CHAF1B)英文名稱:CHAF1B ELISA Kit趨化樣因子超家族成員2亞型1抗體包裝1g
染色質(zhì)域解旋DNA結(jié)合蛋白4(CHD4)英文名稱:CHD4 ELISA Kit18號染色體開放閱讀框1抗體包裝5g
染色框同源物3(CBX3)英文名稱:CBX3 ELISA Kit色c氧化VIIA亞型2抗體包裝100g
黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格:> 95%,BR主要組織相容性復合體,II類,DQα2試劑盒知母皂苷E;Anemarsaponin
蜜蜂生球擬酵母Torulopsis│apicola 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>95%,標準品周期依賴性激5試劑盒知母皂苷元;Sarsasapogenin
乳乳球菌Lactococcus│lactis 質(zhì)量規(guī)格:純度> 98%,BR,可用于培養(yǎng)周期依賴性激4試劑盒醉椒;Kavain
Caspase 3活性檢測試劑盒(比色法)假交替單胞 2-異基乙酰乙酸乙酯血清腫瘤相關(guān)物質(zhì)Elisa
豬瘟病 2,3,5-三氟溴苯血清總補體Elisa
擬青霉 2-氨基異乙酯血栓海綿蛋白Elisa
蘇云金芽胞桿肯尼亞亞種 2-氨基煙乙酯血栓前體蛋白Elisa
四川散斑殼 N-(芐氧羰基)-1H-吡唑-1-甲脒血栓A2Elisa
柱狀田頭菇 乙酸異辛酯血栓B2Elisa
耐冷冷桿 乙酸異丁酯血栓調(diào)節(jié)蛋白Elisa
栗疫 2,4,6-基-3-環(huán)己烯-1-甲;異環(huán)檸檬血糖Elisa
梨葉殼小圓孢 氯代單丁基錫酸血纖蛋白原降解產(chǎn)物Elisa
熱帶假絲酵母 2,4-二氯-3,5-二酚血纖維蛋白溶原Elisa
節(jié)桿 N-BOC-1H-吡唑-1-甲脒血小板VASP;P2Y12Elisa
Pseudarthrobacter 3,4,5-氧基苯乙血小板第三因子Elisa
微桿 3-甲基硫代酸已酯血小板第四因子Elisa
釀酒酵母 普施安藍 MX-R血小板反應蛋白;凝血敏感蛋白1Elisa
深藍鐮孢 3--2-甲酸血小板反應蛋白4Elisa