產(chǎn)品屬性:
中文名稱(chēng):FITC-Brdu細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒(ICF/FACS法)
英文名稱(chēng):BrdU cell proliferation Detection Kit
產(chǎn)品規(guī)格:20T
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
本試劑盒細(xì)胞增殖檢測(cè)是一個(gè)基于熒光檢測(cè)的實(shí)驗(yàn),可以監(jiān)測(cè)細(xì)胞健康和通過(guò)胸苷摻合來(lái)估量DNA 合成從而監(jiān)測(cè)細(xì)胞分裂。 溴脫氧尿苷(5-溴代-2'-脫氧尿苷, BrdU) 是一種合成的核苷酸即胸苷的類(lèi)似物。BrdU 通常被用于檢測(cè)活組織中再生的細(xì)胞。 BrdU 可以摻合到復(fù)制細(xì)胞中新的合成DNA 中(在細(xì)胞周期S 期),在DNA 復(fù)制可代替胸苷。利用抗BrdU 的特異性抗體便可以用于檢測(cè)這個(gè)插入的化學(xué)品,從而檢測(cè)出細(xì)胞是否在復(fù)制其DNA。 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。
質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)英文名稱(chēng):GDNF ELISA KitBcl-2結(jié)合抑凋亡蛋白2抗體包裝250mg
脂氧合同工1(LOX-1)英文名稱(chēng):LOX-1 ELISA Kitβ淀粉樣肽1-42抗體包裝1g
脂聯(lián)(human adiponectin)英文名稱(chēng):human adiponectin ELISA Kit磷化內(nèi)收蛋白抗體包裝5g
脂聯(lián)(Adiponectin/Acrp30)英文名稱(chēng):Adiponectin/Acrp30 ELISA Kit程序性死亡配體1抗體包裝250mg
脂聯(lián)(Adiponectin,Acrp30)英文名稱(chēng):Adiponectin,Acrp30 ELISA Kit程序性死亡配體1抗體包裝1g
脂聯(lián)(Adiponectin)英文名稱(chēng):Adiponectin ELISA Kitβ淀粉樣肽(1-42)抗體包裝5g
脂肪合成(FAS)英文名稱(chēng):FAS ELISA Kitβ淀粉樣肽(1-42)單克抗體包裝100g
胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)英文名稱(chēng):IGFBP-3 ELISA Kit膽汁鹽輸出泵/ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白11抗體包裝25g
血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(PECAM-1/CD31)英文名稱(chēng):PECAM-1/CD31 ELISA KitBSPRY蛋白抗體包裝5g
血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(PECAM1)英文名稱(chēng):PECAM1 ELISA KitBAIAP2L2蛋白抗體包裝50mg
血小板/內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(PECAM-1/CD31)英文名稱(chēng):PECAM-1/CD31 ELISA Kit磷化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體包裝5MG
血小板/內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(PECAM1)英文名稱(chēng):PECAM1 ELISA Kit磷化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體包裝25g
胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TARC/CCL17)英文名稱(chēng):TARC/CCL17 ELISA Kit人β亞基人絨毛膜促性腺激(β HCG)抗體包裝5g
胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TAFA/CCL17)英文名稱(chēng):TAFA/CCL17 ELISA Kit鈣激活通道蛋白 α 1抗體包裝5ml
纖維連接蛋白(FN)英文名稱(chēng):FN ELISA Kit鈣激活通道蛋白 α 1抗體包裝25g
凋亡增強(qiáng)核抗體干擾α4(IFNα4)Entospletinib (GS-9973) is an orally bioavailable, selective Syk inhibitor with
FITC-Brdu細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒(ICF/FACS法)金黃殼囊孢 2,7-二溴-9,9-二癸基芴球蛋白G2a檢測(cè)試劑盒
斑玉蕈 N-芴甲氧羰基-D-2-氨基丁酸球蛋白G2b檢測(cè)試劑盒
金針菇(毛柄、冬菇) 4'-氯-2'-氟苯乙酮球蛋白G3檢測(cè)試劑盒
大腸埃希 2,5-二甲球蛋白G4檢測(cè)試劑盒
藍(lán)色犁頭霉 2-溴-1-(2-吡啶基)-1-乙酮 氫球蛋白M檢測(cè)試劑盒
葡萄座腔 4-氯-2,6-二氟苯甲球蛋白κ自由輕鏈檢測(cè)試劑盒
金耳、 黃木耳 氮雜環(huán)丁烷-3-酮鹽酸鹽球蛋白λ自由輕鏈檢測(cè)試劑盒
皮特遜畢赤酵母 3-氟-4-球蛋白結(jié)合蛋白檢測(cè)試劑盒
黃單胞 1-溴-3,5-二氟-2-苯球蛋白輕鏈kappa抗體檢測(cè)試劑盒
假絲酵母屬 1-(氯二氟甲基)-2-氟苯球蛋白輕鏈lambda檢測(cè)試劑盒
大腸埃希 酮縮氨基硫脲抑制性糖蛋白檢測(cè)試劑盒
突孢毛殼 1H-吲唑-6-羧酸甲酯繆勒管抑制物質(zhì);抗繆勒管檢測(cè)試劑盒
棲葡萄青霉 4-氯-7-甲基噻吩并[3,2-D]嘧啶膜聯(lián)蛋白-A1檢測(cè)試劑盒
沙福芽胞桿 4-環(huán)戊酮-1,2-二甲酸膜聯(lián)蛋白-A2檢測(cè)試劑盒
東方伊薩酵母 3-氯-4-氟苯肼鹽酸鹽末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9檢測(cè)試劑盒
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)