以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Zardaverine是新型的PDE3和4抑制劑,IC50分別為0.5uM和0.8uM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):101975-10-4 純度:98.17% 分子量:268.22 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
喬木鏈格孢氧化蛋白質(zhì)水解Human IGHD ELISA Kit小鼠抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG)免疫試劑盒
污黑腐皮殼鐵調(diào)節(jié)蛋白2抗體Human IGKV1-5 ELISA Kit小鼠抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)免疫試劑盒
樹(shù)舌乙脫氫1型抗體Human IGSF8 ELISA Kit小鼠抗心肌抗體(AMA)免疫試劑盒
米根霉AFP4a蛋白抗體Human IGSF11 ELISA Kit小鼠抗小核糖核蛋白/Sm(snRNP/Sm)抗體免疫試劑盒
藍(lán)微褐鏈霉菌Rho GTP激活蛋白32抗體Human IGSF21 ELISA Kit小鼠抗線粒體ADP/ATP載體(AAC)抗體免疫試劑盒
膠孢能量平衡相關(guān)蛋白抗體Human IKZF3 ELISA Kit小鼠抗透明帶抗體IgG(aZP-IgG)免疫試劑盒
孢木霉禽腦脊髓炎病AEV抗體Human IMMP2L(Mitochondrial inner membrane protease subunit 2) ELISA Kit小鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(IgM)免疫試劑盒
長(zhǎng)孺孢腺苷環(huán)化7抗體Human ILKAP ELISA Kit小鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(IgG)免疫試劑盒
灰色產(chǎn)色鏈霉菌腺苷環(huán)化4抗體Human IFT81 ELISA Kit小鼠抗人生長(zhǎng)激抗體(IgG)免疫試劑盒
星孢毛銹傘腺苷活化蛋白激γ1抗體Human IFIT3 ELISA Kit小鼠抗平滑肌抗體(ASMA)免疫試劑盒
鏈格孢芳香N-乙酰化轉(zhuǎn)移抗體Human IFT88 ELISA Kit小鼠抗凝血Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)免疫試劑盒
固氮菌腺苷環(huán)化8抗體Human IFT52 ELISA Kit小鼠抗內(nèi)皮抗體(AECA)免疫試劑盒
谷棒桿菌腺苷環(huán)化10抗體Human IFT43 ELISA Kit小鼠抗利尿激/血管加壓/精加壓(ADH/VP/AVP)免疫試劑盒
紅緣層孔菌腺苷環(huán)化5抗體Human IFT57 ELISA Kit小鼠抗性磷5b(TRACP-5b)免疫試劑盒
異配囊接霉腺苷環(huán)化6抗體Human IFT80 ELISA Kit小鼠抗抗體(AsAb)免疫試劑盒
達(dá)里湖芽孢桿菌腺苷環(huán)化9抗體Human IARS2 ELISA Kit小鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)免疫試劑盒
棘孢青霉Penicillium│aculeatum 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR白介1β試劑盒他克莫司
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>97%,分子生物學(xué)級(jí)白介1α試劑盒蛇床
栗疫菌Cryphonectria│parasitica (Murrill) M. E. Barr 質(zhì)量規(guī)格:> 98%,BR白介19試劑盒山梔子苷B
PDE3和4抑制劑(Zardaverine)沙棘(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Oroxin B激-M2包裝100g
沙棘膏(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fosfomycin tromethamine間皮抗體包裝25g
沙苑子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fosfomycin tromethamine基質(zhì)金屬蛋白-1抗體包裝100g
沙苑子苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cynaroside基質(zhì)金屬蛋白-1抗體包裝25g
沙苑子苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Costundide基質(zhì)金屬蛋白13抗體包裝5g
砂仁(陽(yáng)春砂)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Pseudoginsenoside F11基質(zhì)金屬蛋白-14抗體包裝100ml
山茶甙A英文名稱: Pseudoginsenoside RT5基質(zhì)金屬蛋白2抗體包裝25ml
山茶甙B英文名稱: Allantoin基質(zhì)金屬蛋白3抗體包裝250mg
山茶苷A英文名稱: Limonin基質(zhì)金屬蛋白-7抗體包裝100mg
山豆根(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Limonin基質(zhì)金屬蛋白-9抗體包裝1g
山風(fēng)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Limonin髓鞘少樹(shù)突膠質(zhì)糖蛋白抗體包裝500mg
山姜(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Stearic acid多藥耐藥相關(guān)蛋白1抗體包裝10MG
山橿根(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Stearic acid多藥耐藥相關(guān)蛋白2抗體包裝50MG
山臘梅葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Arctigenin多藥耐藥相關(guān)蛋白3抗體包裝100g
山蠟梅堿英文名稱: Arctiin線粒體核糖體蛋白L28抗體包裝25g