以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
XTT(二甲氧唑黃)是一種類似于MTT 的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,活細(xì)菌線粒體中存在與輔酶Ⅱ相關(guān)的脫氫酶,可將黃色的XTT 還原成水溶性的橘黃色的甲月贊。生成的甲臜能夠溶解在組織培養(yǎng)基中,不形成顆粒,可直接用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀檢測(cè)定吸光值。 操作方法 1. 96 孔板加入細(xì)菌100μL/孔(約1×104),置37℃ 5%CO2 細(xì)菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 小時(shí)。2.加入適當(dāng)濃度的受試化合物。3.將96 孔板在37℃,含5% CO2 空氣及100%濕度的細(xì)菌培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。 4. 向各孔中加入20 μl 的XTT 工作液。 5. 37℃下孵育1~4 小時(shí)。 6. 酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
DAB2互作蛋白(DAB2IP)英文名稱:DAB2IP ELISA Kit磷化癌易感基因1抗體包裝100mg
C型鈉尿肽(CNP)英文名稱:CNP ELISA Kit磷化癌易感基因1抗體包裝25mg
C肽(C-Peptide)英文名稱:C-Peptide ELISA Kit磷化非受體性蛋白酪激ETK抗體包裝1g
C反應(yīng)蛋白(CRP)英文名稱:CRP ELISA Kit磷化B-Raf抗體包裝5g
CXC趨化因子受體4(CXCR4)英文名稱:CXCR4 ELISA Kit癌易感基因相互作用蛋白1抗體包裝500g
CXC趨化因子受體3(CXCR3)英文名稱:CXCR3 ELISA Kit磷化癌易感基因相互作用蛋白1抗體包裝100g
CXC趨化因子配體16(CXCL16)英文名稱:CXCL16 ELISA Kit磷化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體包裝500g
CXC趨化因子13(Cxcl13/Blc/Scyb13)英文名稱:Cxcl13/Blc/Scyb13 ELISA Kit磷化BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體包裝1g
CD8分子(CD8)英文名稱:CD8 ELISA Kit磷化BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體包裝1g
CD4分子(CD4)英文名稱:CD4 ELISA Kit磷化B-Raf抗體包裝1g
CD45分子(CD45)英文名稱:CD45 ELISA Kit磷化B-Raf抗體包裝25g
CD44分子(CD44)英文名稱:CD44 ELISA Kit磷化Bcl-xL蛋白抗體包裝5g
CD3分子(CD3)英文名稱:CD3 ELISA Kit高表達(dá)神經(jīng)上皮蛋白BTG3抗體包裝1g
CD34分子(CD34)英文名稱:CD34 ELISA KitB遷移基因4抗體包裝25g
CD33分子(CD33)英文名稱:CD33 ELISA KitBCL2相互作用蛋白質(zhì)抗體包裝5g
血管內(nèi)皮遷移蛋白抗體肝核因子1β(HNF1β)Deltarasin is a small molecular inhibitor of KRAS-PDEδ interaction with Kd of 38
XTT細(xì)菌增殖及細(xì)菌毒性檢測(cè)試劑*正紅菇 5-溴-2-甲酯類固5α還原酶2檢測(cè)試劑盒
豬丹絲 2-基吡類趨化因子受體CMLR1檢測(cè)試劑盒
密蘇里游動(dòng)放線 (S)-2-甲基吡咯烷鹽酸鹽類胰蛋白酶檢測(cè)試劑盒
粉紅單端孢霉 3-(氨甲酰甲基)-5-甲基己酸冷球蛋白檢測(cè)試劑盒
釀酒酵母 N-Boc-3-甲基-4-酮冷誘導(dǎo)RNA結(jié)合蛋白檢測(cè)試劑盒
蠟狀芽孢桿 3-溴-4-氯吡啶鹽酸鹽利什曼原蟲(chóng)抗體檢測(cè)試劑盒
根瘤 4-氟-D-苯氨酸粒集落激因子檢測(cè)試劑盒
腸沙門(mén)氏腸炎亞種 硫酸原黃素粒巨噬集落激因子檢測(cè)試劑盒
面粉增白劑速測(cè)卡 6-溴-2-氯喹啉連接蛋白-1檢測(cè)試劑盒
桔橙鏈霉 1,7-二旋氧雜[5.5]十一烷鏈激酶檢測(cè)試劑盒
Pilidium concavum 4-氟-3-甲酸甲酯亮氨酸氨肽酶檢測(cè)試劑盒
藻渣梭 4-氟-2-甲酸甲酯亮氨酸腦啡肽檢測(cè)試劑盒
煙曲霉 2-(4-甲基-1-哌)苯磷酸苷油酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒
黑色小單孢 3,4-二芐氧基磷酸果糖激酶檢測(cè)試劑盒
莖生擬莖點(diǎn)霉 4-三乙氧硅基聯(lián)苯磷酸化AKT蛋白檢測(cè)試劑盒