以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
FAAH抑制劑(PF-3845) | PF-3845 | 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
PF-3845是選擇性脂肪酰胺水解酶(FAAH)抑制劑,Ki為230nM,對(duì)FAAH2幾乎無活性。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1196109-52-0 純度:98.94% 分子量:456.46 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
北京棒桿菌磷化自噬相關(guān)蛋白4D抗體Human IRF6(Interferon regulatory factor 6) ELISA Kit小鼠粒集落激因子(G-CSF)免疫試劑盒
洋蔥假單胞菌磷化自噬相關(guān)蛋白4C抗體Human INPP5A ELISA Kit小鼠酪羥化(TH)免疫試劑盒
糞銹傘磷化自噬相關(guān)蛋白7抗體Human INPP5B ELISA Kit小鼠跨膜蛋白97(TMEM97/MAC30)免疫試劑盒
印度拜葉林克氏菌磷化自噬相關(guān)蛋白16A抗體Human INPP5E ELISA Kit小鼠克拉拉蛋白(CC16)免疫試劑盒
釀酒酵母磷化自噬相關(guān)蛋白9A抗體Human INPP5J ELISA Kit小鼠可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sTRAIL)免疫試劑盒
毛榛畢赤酵母磷化自噬相關(guān)蛋白4D抗體Human INPP5K ELISA Kit小鼠可溶性血小板內(nèi)皮粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)免疫試劑盒
戊糖乳桿菌磷化自噬相關(guān)蛋白4D抗體Human Importin beta ELISA Kit小鼠可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白(sTM)免疫試劑盒
7#---2號(hào)(網(wǎng)紋馬勃)磷化腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)志物8抗體Human INTS4 ELISA Kit小鼠可溶性血管內(nèi)皮蛋白C受體(sEPCR)免疫試劑盒
木霉磷化自噬相關(guān)蛋白4A抗體Human INTS12 ELISA Kit小鼠可溶性髓系觸發(fā)受體-1(sTREM-1)免疫試劑盒
溶桿菌磷化自噬相關(guān)蛋白4C抗體Human INTS7 ELISA Kit小鼠可溶性瘦受體(sLR)免疫試劑盒
白金針菇—2號(hào)磷化自噬相關(guān)蛋白16A抗體Human INTS5 ELISA Kit小鼠可溶性凝集樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)免疫試劑盒
楊爛皮殼蕉孢菌磷化蛋白激AKT3抗體Human INTS9 ELISA Kit小鼠可溶性肌球蛋白重鏈2(sMHC-2)免疫試劑盒
香菇磷化腎上腺能受體β2抗體Human INPP5J ELISA Kit小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)免疫試劑盒
間座殼磷化水通道蛋白2抗體Human ING5 ELISA Kit小鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)免疫試劑盒
丁香假單胞菌磷化自噬相關(guān)蛋白3抗體Human INMT ELISA Kit小鼠可溶性補(bǔ)體激活產(chǎn)物SC5b9 免疫試劑盒
異常威克漢姆酵母縮2抗體Human INO80 ELISA Kit小鼠可溶性Toll樣受體9(sTLR9/sCD289)免疫試劑盒
: T.666242資源名稱: 傷寒沙門氏菌 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR白介1受體拮抗劑試劑盒11-羰基-Β-乙酰乳香
柴油食烷菌Alcanivorax│dieselolei 質(zhì)量規(guī)格:>90%,BS白介1可溶性受體Ⅱ試劑盒拓?fù)涮婵?/span>
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR白介1可溶性受體Ⅰ試劑盒檀香
FAAH抑制劑(PF-3845)三尖杉寧堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Mogroside Ⅴ膜相關(guān)環(huán)指蛋白10抗體包裝1g
三角葉薯蕷皂苷英文名稱: Rosavin粘膜相關(guān)組織瘤轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體包裝5g
三棱(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Astilbin粘膜血管定居因子抗體包裝100g
三七(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Loganin抑癌基因抗體包裝25g
三七皂甙R1(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Loganic acid神經(jīng)上皮酪激/癌激10抗體包裝5g
三七皂苷Fa英文名稱: Ophiopogonin DMHC I類鏈相關(guān)蛋白A/組織相容性復(fù)合物MHCIa抗體包裝25g
三七皂苷Fe(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ergosterol中腦核仁蛋白抗體包裝5g
三七皂苷Ft1(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ergosterol巨噬移動(dòng)抑制因子抗體包裝1g
三七皂苷R2(R型)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Vitexicarpin巨噬炎癥因子1α抗體 MIP-1α包裝25g
三七皂苷R2(S型)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Mangiferin蕈堿型乙酰受體M1抗體包裝5g
三七總皂苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Mangiferin髓鞘相關(guān)糖蛋白a/b抗體包裝1g
三肉豆蔻甘油酯英文名稱: Calycosin絲裂原活化蛋白激激1抗體包裝5g
三葉甙;三葉苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Calycosin-7-O-β-D-glucoside絲裂原活化蛋白激激2抗體包裝1g
桑白皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: GC; (-)-gallocatechin蛋白裂解(一種新的癌基因)抗體包裝5g
桑根L英文名稱: GCG;(?)-Gallocatechin gallate髓鞘堿性蛋白/磷脂堿性蛋白抗體包裝1g