商品介紹:
用途: 組織脫鈣,螯合脫鈣劑 注意事項: 主要由EDTA、福爾馬林等組成。相對于常規(guī)EDTA脫鈣液,該試劑脫鈣后對組織結(jié)構(gòu)損害小,但脫鈣速度更慢,。 儲存條件:室溫,12個月 |
以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
杠柳苷元;杠柳苷元;無杠柳苷苷元英文名稱: N-(Ethoxycarbonylmethyl)-6-methoxyquinolinium bromide磷化KLF5抗體包裝1g
杠柳寡糖B英文名稱: A771726 (Teriflunomide)特異性離子通道蛋白抗體包裝5g
杠柳寡糖C英文名稱: Angeloylgomisin H沉默驅(qū)動蛋白KIF4A抗體包裝1g
高車前苷英文名稱: MethyltrienoloneATP敏感離子通道蛋白抗體包裝25g
高車前英文名稱: Crotamiton KIAA1462蛋白抗體包裝5g
高麗紅參(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: ChlorosulfuronKIAA1549蛋白抗體包裝25MG
高麗槐(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-Sepiapterin基爾曼氏細小病VP1/VP2抗體(大鼠潛在病KRV)C端包裝100g
高良姜(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: MotesanibKelch樣蛋白20抗體包裝25g
高良姜(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sciadopitysin激肽釋放抑制劑抗體包裝500g
高三尖杉酯堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 10-Hydroxy-2-decenoic acidkelch樣蛋白7抗體包裝5g
高山紅景天(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: AST-1306 mesylateTWIK相關(guān)敏感離子通道蛋白9抗體包裝1g
高烏(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Laropiprant,MK-0524激肽釋放6抗體包裝250mg
高香草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ceftiofur hydrochloride激肽釋放8抗體包裝50mg
膏桐(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ceftiofur hydrochloride血漿激肽釋放抗體包裝25g
藁本(遼藁本)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: zafirlukast磷化抑癌蛋白EZH2抗體包裝5g
南海海棲菌Oceanicola│nanhaiensis 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BP,BR抗血小板抗體IgM試劑盒甘松新;Nardosinone
玫瑰色鮮艷菌Roseivivax│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR抗血小板抗體IgG試劑盒光翠雀堿; denudatine
地衣芽孢桿菌Bacillus│licheniformis 質(zhì)量規(guī)格:≥99.0%,BR抗血小板抗體IgA試劑盒甘油三油酯;Triolein
福爾馬林-EDTA脫鈣液枯草芽孢桿 2-芐基烯酸E3泛連接Elisa
漢遜德巴利酵母 5-氨基-2-氯嘧啶香豆酸-3-羥化Elisa
芽孢桿 芐氧羰基-羥基甘氨酸5-氨基酮戊酸脫水Elisa
毛栓孔 4-氯-2-氟芐5-氨基酮戊酸Elisa
貝倫格葡萄座腔梨生?;?/span> 2,4-二氟芐尿卟啉原Elisa
滑菇 4,4'-(1,2-二乙基亞乙基)二尿卟啉原合Elisa
產(chǎn)黃青霉 1-(4-羥丁基)-4-甲基哌單氧化BElisa
蠟樣芽孢桿 2-(叔-丁基)苯基異酸酯腐N-甲基轉(zhuǎn)移Elisa
彎孢 2-哌酮20S蛋白體Elisa
云芝 1-芐基-4-基-4-苯基鹽酸鹽α-L-巖藻糖苷Elisa
短桿 順式-4-氨基環(huán)己鹽酸鹽抗壞血酸過氧化物Elisa
Cystofilobasidium 二鹽基性硬脂酸鉛β-1,3-葡聚糖Elisa
致病擬桿 頭孢西酮色P4503A4Elisa
糞腸球 2,4-二氨基-6-羥基嘧啶羥甲基戊二酸單酰Elisa
枯草芽孢桿 5,6-二氯煙酸甲酯葡萄糖苷酸Elisa