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詳細介紹
商品介紹：
PKH67/PI 雙染細胞毒性檢測試劑盒是利用細胞熒光染料PKH67和PI對細胞進行染色，利用PKH67標記靶細胞，PI標記死的靶細胞來區(qū)分不同的細胞，活的靶細胞成綠色，死的靶細胞成紅色和綠色，從而檢測細胞毒性作用。 根據(jù)不同的實驗方案設計，可以用來檢測化合物的細胞毒性作用。也可以用來檢測殺傷性T 細胞或NK 細胞介導的細胞毒作用。 熒光染料PKH67是一種可對活細胞進行熒光標記的新型染料，可以標記活體細胞，通過與膜結構的脂質分子結合而標記細胞。對細胞毒性較小，熒光背景低，脂溶性高，能夠輕易穿透細胞膜，有著強而穩(wěn)定的綠色熒光。經PKH67標記的細胞可用于體外和體內增殖研究，且具有不會使鄰近細胞染色的功能。 在細胞分裂增殖過程中，PKH67的熒光強度會隨著細胞的分裂而逐級遞減，標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，因此其熒光強度是親代細胞的一半，根據(jù)這一特性，它可被用于檢測細胞增殖，細胞周期的估算及細胞分裂等方面。PKH67標記細胞的熒光非常均一，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均一。在細胞分裂增殖過程中，PKH67標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，熒光強度變?yōu)橛H代細胞的一半，通過流式細胞儀根據(jù)熒光強度的不同，可檢測出未分裂細胞，分裂一次(1/2的熒光強度)，二次(1/4的熒光強度)，三次(1/8的熒光強度)，以及更多分裂次數(shù)的細胞。PKH67可檢測分裂次數(shù)多達六次甚至更多。 除了用于細胞增殖檢測，PKH67 還可以用于細胞的體外盒體內示蹤，標記后熒光在胞內表達穩(wěn)定，陽性標記率達98%以上，標記細胞形態(tài)良好，能有效地觀察細胞在體外的誘導分化情況；或將標記的細胞注入體內，可以有效的顯示移植細胞在活體組織中的遷移及分化。 PKH67標記的細胞用于體內觀察可以長達數(shù)周之久，它常被用來做活體細胞檢測實驗和用熒光電鏡觀察細胞長期活動的實驗。PKH67 毒性較小，不影響細胞的增殖能力。此方法操作簡單，且不用放射性同位素，不存在安全隱患。可以更快速，更準確和更安全地得到想要的實驗數(shù)據(jù)。 PKH67/PI標記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞毒性檢測。 PKH67標記細胞呈綠色熒光，熒光波長：λex=490 nm,λem=502 nm。流式檢測時的激發(fā)波長可以選擇488nm，此時的發(fā)射波長為502nm，使用流式細胞儀檢測時可以采用FL1 detection channel。PI標記細胞呈紅色熒光，流式檢測時的激發(fā)波長可以選擇488nm，此時的發(fā)射波長為647nm，使用流式細胞儀檢測時可以采用FL2 detection channel。 PKH67標記的細胞除了流式細胞儀檢測細胞毒性外，還可單染后用于細胞增殖檢測，或者用熒光酶標板定量活細胞數(shù)目，或者用熒光顯微鏡進行均一染色的細胞示蹤觀察。 儲存條件：-20℃避光保存。 |
產品屬性：
中文名稱：PKH67/PI雙染細胞毒性檢測試劑盒
英文名稱：
產品規(guī)格：500T
發(fā)貨周期：1～3天
公司產品僅用于科研
細胞生物學研究有以下幾個方面：
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括：
①細胞核、染色體以及基因表達的研究；
②生物膜與細胞器的研究；
③細胞骨架體系的研究；
④細胞增殖及其調控；
⑤細胞分化及其調控；
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細胞的起源與進化；
⑧細胞工程.
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
Pregnenolone(標準品)英文名稱： 6-TG/ThioguanineCD9蛋白抗體包裝100g
Progesterone（標準品）英文名稱： 6-TG/ThioguanineCD23/FcεRII抗體包裝25g
Promestriene(標準品)英文名稱： All-Trans-Retinoic Acid\TretinoinCD27抗體包裝500g
RNH-奧美沙坦酯雜質（標準品）英文名稱： All-Trans-Retinoic Acid\TretinoinCD30抗體包裝25g
Rosiglitazone HCL (標準品)英文名稱： BicalutamideCD43抗體包裝5g
Rosiglitazone Maleate（標準品）英文名稱： BicalutamideCD48抗體包裝1g
Rosiglitazone（標準品）英文名稱： Busulfan/MyleranCD44抗體包裝5g
Sitagliptin phosphate monoh...英文名稱： Busulfan/Myleran整合αX抗體包裝100g
Sivelestat sodium (標準品)英文名稱： Lomustine表面趨化因子受體5抗體包裝25g
Sorafenib tosylate（標準品）英文名稱： LomustineCD2抗體包裝25g
Stanozolol（標準品）英文名稱： Hydroxyurea/HydroxycarbamideC-肽抗體包裝5g
Tamoxifen Citrate （標準品）英文名稱： Hydroxyurea/Hydroxycarbamide鈣結合蛋白抗體包裝1g
Tetrabenazine(標準品)英文名稱： Toremifene CitrateC-反應蛋白抗體包裝5g
Toremifene Citrate（標準品）英文名稱： Toremifene CitrateC-反應蛋白單克抗體包裝100g
Triamcinolone Acetonide(標準品...英文名稱： Toremifene Citrate環(huán)腺苷應答元件結合蛋白抗體包裝25g
產黑假交替單胞菌Pseudoalteromonas│nigrifaciens 質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品血管抑/血管穩(wěn)定蛋白試劑盒血竭;Cochinchinenin
ATCC35674資源名稱: 自養(yǎng)黃色桿菌 質量規(guī)格：>98%,5-HT2A高效選擇性激動劑血管性血友病因子裂解試劑盒西貝母堿苷;Sipeimine-3β-D
耐熱克魯維酵母Kluyveromyces│thermotolerans 質量規(guī)格：>99%血管舒緩激肽試劑盒繡球酚 ;Hydrangenol
PKH67/PI雙染細胞毒性檢測試劑盒釀酒酵母 2-氯-4-氨基-6,7-二甲氧基喹唑啉絲聚合蛋白Elisa
印度芽孢桿 2-乙基-6-甲基-3-羥基吡啶腺病IgM抗體Elisa
枯草芽孢桿 4-溴-2-酚過氧化物3Elisa
棘孢木霉 2-氟-2-磷?；宜崛阴サ脱跽T導因子2Elisa
外皮毛霉 4-苯基-2-丁諾如病Elisa
釀酒酵母 α-異丁酸甲酯甘油三磷酸脫氫Elisa
阿爾通山堿線 4-氟苯甲脒鹽酸鹽激活BElisa
發(fā)根土壤桿 4-氟-3-甲低密度脂蛋白復合物Elisa
芽孢桿屬 3,4-二氟苯酮Egl九同源物Elisa
矩圓黑盤孢 N-正辛基-D-葡萄糖甘油三磷酸脫氫Elisa
假單胞 磺氯噠鈉百日咳IgG抗體Elisa
海水鹽單胞 6,7-二甲氧基-1,2,3,4-四氫異喹啉 鹽酸鹽硒蛋白P1Elisa
膜醭畢赤酵母 2-溴-3-甲基-5-硝基吡啶EB病IgA抗體Elisa
卷枝毛霉 2-氯-4-甲基-3-硝基吡啶脯氨酰羥化Elisa
釀酒酵母 反-1,2-環(huán)己烷二甲酸脯氨酰羥化2Elisa
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