公司產(chǎn)品僅用于科研
細胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細胞核、染色體以及基因表達的研究;
②生物膜與細胞器的研究;
③細胞骨架體系的研究;
④細胞增殖及其調(diào)控;
⑤細胞分化及其調(diào)控;
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細胞的起源與進化;
⑧細胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:Caspase 2熒光法檢測試劑盒(AFC)
英文名稱:Caspase-2 Fluorescence Metric Assay
產(chǎn)品規(guī)格:20T|50T|100T
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
本試劑盒適用于培養(yǎng)細胞及新鮮組織Caspase-2 檢測。Caspase 家族在介導(dǎo)細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用,其中Caspase-2 為關(guān)鍵的執(zhí)行分子,與DNA 斷裂、染色質(zhì)凝聚和凋亡小體形成有關(guān)。Caspase-2 在正常狀態(tài)下以酶原的形式存在于胞漿中,沒有活性;但在細胞發(fā)生凋亡階段,它被激活,活化的Caspase-2 由兩個大亞基和兩個小亞基組成,裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物,終導(dǎo)致細胞凋亡。Caspase-2 熒光檢測試劑盒就是將Caspase-2 序列特異性的多肽偶聯(lián)至發(fā)色基團。當(dāng)?shù)孜锉籆aspase-2 剪切后,發(fā)色基團即游離出來,可通過熒光酶標(biāo)儀測定其熒光強度(激發(fā)波長=485nm,發(fā)射波長=535nm)。 注意事項 1. Caspase-2 Substrate 避光保存及使用。 2. 對某些凋亡誘導(dǎo)劑引起的細胞凋亡可能存在非依賴于Caspase-2 活化的機制,這種情況時利用本試劑盒檢測Caspase-2 活性無明顯改變,需要考慮凋亡機制中的其他信號通路。 3. 細胞數(shù)量需達到3~5×106 個或新鮮組織50~100mg,以便能達到測定需要的100~200μg 蛋白的要求,因為Caspase-2 的活性與細胞裂解液的蛋白含量有關(guān),如測定的RFU 值偏低,可以通過適當(dāng)延長反應(yīng)的時間,如果值還是不高,可通過增加細胞數(shù)量或組織量的方法來提高蛋白量。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
大內(nèi)皮(Big ET)英文名稱:Big ET ELISA Kit溶血磷脂?;D(zhuǎn)移D抗體包裝1g
大動脈平滑肌肌動蛋白α2(Acta2/Actsa/Actvs)英文名稱:Acta2/Actsa/Actvs ELISA Kit載脂蛋白E3抗體包裝250mg
催乳抑制激(PIH)英文名稱:PIH ELISA KitABI基因家族2抗體包裝1g
催乳釋放激(PRH)英文名稱:PRH ELISA Kit氧化蛋白質(zhì)解包裝5g
催乳(PRL)英文名稱:PRL ELISA Kit鐵調(diào)節(jié)蛋白2抗體包裝500mg
催產(chǎn)(OT)英文名稱:OT ELISA Kit乙脫氫1型抗體包裝50mg
促有絲分裂因子(MF/MPF)英文名稱:MF/MPF ELISA KitAFP4a蛋白抗體包裝1g
促性腺激釋放激(GnRH)英文名稱:GnRH ELISA KitRho GTP激活蛋白32抗體包裝250mg
促生長激釋放激(GHRH)英文名稱:GHRH ELISA Kit能量平衡相關(guān)蛋白抗體包裝5g
促腎上腺皮質(zhì)激釋放因子(CRF)英文名稱:CRF ELISA Kit禽腦脊髓炎病AEV抗體包裝5mg
促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)英文名稱:ACTH ELISA Kit腺苷環(huán)化7抗體包裝25g
促腎上皮質(zhì)激釋放激(CRH)英文名稱:CRH ELISA Kit腺苷環(huán)化4抗體包裝5g
促卵泡(FSH)英文名稱:FSH ELISA Kit腺苷活化蛋白激γ1抗體包裝1g
促狀腺釋放激(TRH)英文名稱:TRH ELISA Kit芳香N-乙?;D(zhuǎn)移抗體包裝1g
促狀腺(TSH)英文名稱:TSH ELISA Kit腺苷環(huán)化8抗體包裝1g
三磷腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運蛋白G超家族成員2抗體結(jié)締組織生長因子(CTGF)AR-A014418 is an ATP-competitive, and selective GSK3β inhibitor with IC50 and Ki
Caspase 2熒光法檢測試劑盒(AFC)丁香假單胞 4-羥基-6-氯喹唑啉基質(zhì)金屬蛋白酶8檢測試劑盒
異常威克漢姆酵母 6--4-羥基喹唑啉基質(zhì)金屬蛋白酶9檢測試劑盒
假交替單胞屬 2-甲氧基-3-硝基-4-甲基吡啶基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1檢測試劑盒
棲土曲霉 1-乙酰-4-基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2檢測試劑盒
蜥蜴纖細芽孢桿 2-(1H-吡唑-1-基)乙酸基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子3檢測試劑盒
釀酒酵母 5-氯-6-甲基尿嘧啶基質(zhì)裂解蛋白;基質(zhì)溶素檢測試劑盒
*櫻桃鏈格孢 1-(3-甲氧基苯基)哌基質(zhì)裂解素檢測試劑盒
金龜子綠僵 N,N-二甲基1,4-丁烷二基質(zhì)衍生因子1檢測試劑盒
釀酒酵母 4-甲基-2-戊基-1,3-二氧戊環(huán)基質(zhì)衍生因子1α檢測試劑盒
Sphingobium rhizovicinum 2-氯-5-甲氧基苯并咪唑基質(zhì)衍生因子1β檢測試劑盒
大腸埃希氏 3,4-二甲氧基甲酯基質(zhì)相互作用分子1檢測試劑盒
小孢擬盤多毛孢 N-Boc-4-亞甲基激活素A檢測試劑盒
盤長孢狀盤孢 2'-F-Ac-dC亞磷酰單體敏感性脂肪酶檢測試劑盒
玫煙色棒束孢 N-乙?;?5'-O-[雙(4-甲氧基苯基)苯基]-2'-脫氧-2'-氟胞苷激肽釋放酶10檢測試劑盒
豬鏈球分型血清參考品 血清型 SS3 3-氟-2-甲基吡啶激肽釋放酶11檢測試劑盒