以下是細胞生物學(xué)試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Hoechst33258染色液 | Hoechst33258 Staining Solution | 10ml|50ml | 1~3天 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
用途: 細胞凋亡檢測、普通細胞核染色、常規(guī)的DNA染色。 注意事項: Hoechst33258是一種熒光染料,可以穿透細胞膜的藍色熒光染料,對細胞的毒性較低。染色染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。可直接用于固定細胞或組織的細胞核染色,也可直接用于活細胞或組織的細胞核染色。 儲存條件:-20℃,避光,6個月 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
毛鉤藤堿英文名稱: (E)-2-ButenalG蛋白γ13/Gγ13 抗體包裝1g
毛訶子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: DodecaneG蛋白γ5/Gγ5 抗體包裝1g
毛花苷C英文名稱: Decanoic acidG蛋白γ 1/Gγ 1 抗體包裝250mg
毛蘭(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dimethyl adipate鳥嘌呤核苷結(jié)合蛋白2抗體包裝5g
毛里求斯排草英文名稱: Dibutyl maleate鳥嘌呤核苷結(jié)合蛋白3樣蛋白抗體包裝100ml
毛兩面針英文名稱: Dimethyl sulfoxide溶體累積病相關(guān)蛋白/口吃相關(guān)蛋白抗體包裝500ml
毛蕊異黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: n-Decyl alcohol溶體累積病相關(guān)蛋白/口吃相關(guān)蛋白抗體包裝100g
毛蕊異黃苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Diethyl succinate促性腺激釋放激2抗體包裝25g
茅膏菜(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Diethyl sebacate基葡萄糖6-硫酯抗體包裝500g
沒食子兒茶(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Docosane高爾基體膜相關(guān)蛋白抗體包裝1g
沒食子兒茶沒食子酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dotriacontane高爾基體膜相關(guān)蛋白5抗體包裝25g
沒食子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 1-Heptanol高爾基體膜相關(guān)蛋白7抗體包裝5g
沒食子酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 4-Hydroxybutanoic acid lactone高爾基復(fù)合體CFR1抗體包裝100g
沒食子一物(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: γ-Heptalactone高爾基體蛋白97抗體包裝25g
沒食子酰芍藥苷英文名稱: (+)-Fenchone高爾基體蛋白A亞基4抗體包裝100mg
細極鏈格孢Alternaria│tenuissima (Kunze) Wiltshire 質(zhì)量規(guī)格:>98%葡萄糖6磷脫氫試劑盒蔓荊子黃;Casticin
地中海中慢生根瘤菌Mesorhizobium│mediterraneum 質(zhì)量規(guī)格:>95%,高效的選擇性亞型2鈉-葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白(SGLT2) 抑制劑葡萄糖-6-磷/葡萄糖-6-磷酯試劑盒絡(luò)塞定;Rosiridin
蠕蟲節(jié)叢孢Arthrobotrys│vermicola 質(zhì)量規(guī)格:AR,分析純破傷風(fēng)試劑盒絡(luò)緦;Rosin
Hoechst33258染色液新疆鹽地桿 10-溴-1-癸烯Ras相關(guān)C3肉底物1Elisa
釀酒酵母 2-氯-3-氟-4-(三氟甲基)吡啶肽-主要組織相容性復(fù)合體復(fù)合物Elisa
硫磺 (R)-(+)-1,2,3,4-四氫-3-異喹啉甲跨膜絲氨酸蛋白143Elisa
傳染性支氣管炎病 [二]乙酸亞甲酯血管內(nèi)皮鈣黏蛋白5Elisa
黃褐環(huán)銹傘 反-戊烯二酸膠原凝集11Elisa
約氏黃桿 1-(2-氨基乙基)-2-咪唑啉酮促消退介質(zhì)Elisa
榛色假單胞 4,4-二甲氧基-3-羰基戊酸甲酯磷酸糖異構(gòu)1Elisa
大腸埃希氏桿 3-羥基-2-吡啶甲酸甲酯類白抗體Elisa
埃里希青霉 3-[4-(芐氧基)苯基]烯酸酚Elisa
Chitinophaga sancti 1-芐基-4-基24-羥基膽固Elisa
雙孢蘑菇 4-羥基吡咯烷-2-2-溴-5-甲氧基-1,3-二甲苯尿苷二磷酸葡萄糖Elisa
節(jié)桿屬 4-羥基吡咯烷-2-酮鳥苷二磷酸葡萄糖Elisa
秦氏蜜環(huán) 4-(4-羥基苯基)5-羥色受體1B抗體Elisa
賈巴爾普爾毛殼 苯硫胃泌17抗體Elisa
哈茨木霉 9-(4-溴苯基)-10-苯基蒽含半胱氨酸豐富分泌蛋白LCCL域蛋白2Elisa