以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
XTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒是應(yīng)用二甲氧唑黃2,3-bis[2-methoxy -4-nitro-5-sμlfophenyl]-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-tetrazolium hydroxide快速高靈敏度檢測(cè)細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的比色檢測(cè)產(chǎn)品。 XTT在電子耦合試劑存在的情況下能夠被線粒體內(nèi)的一些與輔酶Ⅱ相關(guān)的脫氫酶還原成橙黃色的水溶性的Formazan,生成的Formazan量與活細(xì)胞數(shù)量成正比。細(xì)胞增殖越多越快,則顏色越深;細(xì)胞毒性越大,則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞,顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)量呈線性關(guān)系。 本XTT試劑為配制好的即用型試劑,直接加入到細(xì)胞樣品中,不需要預(yù)配各種成分,XTT試劑很穩(wěn)定,對(duì)細(xì)胞沒有毒性,可以長(zhǎng)時(shí)間孵育細(xì)胞。XTT 法測(cè)定細(xì)胞增殖或毒性試驗(yàn)中活細(xì)胞數(shù)目的靈敏度高,無放射性,檢測(cè)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的靈敏度比其它方法如MTT高。 儲(chǔ)存條件:2-8℃避光保存。長(zhǎng)期存放-20℃避光保存。 注意: 1.XTT試劑短期存放于2-8℃,長(zhǎng)期存放請(qǐng)分裝后-20℃避光保存。 2.避免反復(fù)凍融。 3.凍存后溶解時(shí)注意重新混勻。 有效期:一年。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
L-腎上腺(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sumatriptan succinate 順鉑耐藥相關(guān)蛋白9抗體包裝5g
L-絲(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Streptomycin Sulphate22號(hào)染色體開放閱讀框40抗體包裝1g
L-天門冬(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Streptomycin Sulphate嗜粒趨化蛋白3抗體包裝1g
L-巖藻糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dihydrostreptomycin Sulphate21號(hào)染色體開放閱讀框33抗體包裝250mg
L-異亮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Diclofenac sodium角蛋白15抗體包裝5ml
Lenalidomide(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Diclofenac sodium角蛋白14抗體包裝1g
Letrozole(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Gabapentin神經(jīng)NB3特定蛋白抗體包裝1g
Levonorgestrel(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Gabapentin促胃泌受體抗體包裝5g
Loperamide HCl(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Domperidone單克抗體包裝1g
Losartan Potassium英文名稱: Domperidone2號(hào)染色體開放閱讀框72抗體包裝5g
m-酚-4-磺銨(聚酚磺雜質(zhì))(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Niclosamide間粘附分子3抗體包裝1g
m-酚-4,6-二磺銨 (聚酚磺雜質(zhì))(標(biāo)準(zhǔn)品...英文名稱: Niclosamide染色質(zhì)結(jié)合蛋白Cbx8抗體包裝1g
m-酚-6-磺銨(聚酚磺雜質(zhì))(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ciprofloxacin降鈣抗體包裝25g
MB1120-S英文名稱: Ciprofloxacin降鈣基因相關(guān)肽1型受體抗體包裝5g
Medroxyprogesterone acetate...英文名稱: FamciclovirCD19抗體包裝500mg
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%血漿激肽釋放試劑盒L-纈;L-Valine
: JCM13471資源名稱: DSMZ17855, Type strain 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品血漿α顆粒膜蛋白試劑盒香草;4-hydroxy-3-meth
彩色豆馬勃Pisolithus│tinctorius (Pers.) Coker & Couch 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR血紅氧合2試劑盒雪松;Cedrol
XTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒釀酒酵母 1-N-BOC-4-乙?;蚣る脑?Elisa
糙皮側(cè)耳 2,4,6-三氟異硫酸苯酯彈性蛋白Elisa
佐久氏沙雷氏 3-苯氧基苯甲酰肼DNA甲基化轉(zhuǎn)移3AElisa
總狀毛霉 1-丁基-3-氟苯DNA甲基化轉(zhuǎn)移3BElisa
釀酒酵母 反式-2-三氟甲基肉桂酸副流感病Elisa
稻黑孢霉 (二甲基氨基)二甲基(2,3,4,5,6-五氟苯氧基)亞六氟磷酸鹽抗磷脂酰絲氨酸抗體Elisa
缺陷短波單胞 3-氯吡啶-2-甲核酸外切1Elisa
無 5-氯-2-苯并噻唑啉酮核酸外切1Elisa
靈芝(紅芝,赤芝)(可訂購(gòu)) 2-羥基-3-基吡啶耳石蛋白1Elisa
孟氏假單胞 2-氟-4-橋粒芯蛋白3IgGElisa
孢吸水鏈霉 5-溴-2-氯-4-(苯氧基)-嘧啶蛋白精氨酸脫亞氨4Elisa
白井盤多毛孢 3-基-5-硝基三氟甲苯瓜氨酸化抗凝血Elisa
凝結(jié)芽胞桿 Fmoc-D-3-基苯氨酸c-fosElisa
金產(chǎn)色鏈霉 Fmoc-L-3-基苯氨酸色CElisa
蟲草屬 Fmoc-D-2-氯苯氨酸可溶性內(nèi)皮生長(zhǎng)因子Elisa