商品介紹:
產(chǎn)品特點(diǎn): 1. 操作簡(jiǎn)單、染色穩(wěn)定。 2. 適用范圍廣,可以用于各種石蠟組織切片的染色。 3. 本試劑盒至少可以染色100 張切片。 保存條件:常溫,有效期一年。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
駱駝蓬堿;駱駝蓬靈;哈梅靈(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Sulfaquinoxaline接頭蛋白Gab 1抗體包裝5g
駱駝篷子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Sulfalozine sodium磷化糖原合激3α抗體包裝25g
落花生枝葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Tiamulin磷化神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43抗體包裝5g
落新婦苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Cesium iodide糖原合激-3β抗體包裝100g
麻楓樹(shù)酚B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): 1,3-Dimethyl-2-imidazolidinone抗粘附多肽抗體包裝25g
(草)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Dimethyl sulfoxide腦膠質(zhì)瘤發(fā)病機(jī)制相關(guān)蛋白1抗體包裝500g
(中)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Dodecyltrimethylammonium chloride神經(jīng)膜糖蛋白M6a包裝5g
根(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Methyl ArachidateG蛋白偶聯(lián)受體101抗體包裝250mg
麻醉椒苦英文名稱(chēng): Polyamide胰高血糖樣肽-1受體/GLP-1受體抗體包裝1g
麻醉椒英文名稱(chēng): Polyamide糖磷脂酰肌抗體包裝5g
馬鞭草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Polyamide磷化gp130抗體包裝25g
馬勃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Sodium phosphate dibasic dihydrateS轉(zhuǎn)移ζ1抗體包裝5g
馬齒莧(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Sodium sulfate anhydrous甘-N-?;D(zhuǎn)移抗體包裝25g
馬兜鈴(北馬兜鈴)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Sodium sulfate anhydrous甘-N-酰基轉(zhuǎn)移樣1抗體包裝5g
馬兜鈴A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱(chēng): Sodium bicarbonate 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G3PP抗體包裝1g
青霉菌Penicillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于培養(yǎng) 前動(dòng)力蛋白1試劑盒白綿馬AA;Albaspidin AA
宇佐美曲霉Aspergillus usamii 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品前病整合位點(diǎn)1試劑盒綿馬ABA;Filixic acid
奇跡束絲放線菌Actinosynnema│mirum 質(zhì)量規(guī)格:>900 mcg/mg,BR,可用于培養(yǎng)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4試劑盒麻醉椒苫;methysticin
革蘭氏菌染色鑒定試劑盒(Brown-Brenn)聚貪噬 1-乙基-3-甲基吡啶鎓乙磺酸鹽狂犬病 IGMElisa
多形炭角* 3-甲氧基-5-三氟酸愛(ài)潑斯坦-巴爾病 IGMElisa
貝倫格葡萄座腔梨生專(zhuān)化型 6-溴-2,3-二氟苯基酸二氫尿嘧啶脫氫Elisa
單胞 2-氨基-3-溴-5-氟吡啶Klotho蛋白βElisa
壞損尾孢 1-氨基-3,6,9-三噁-11-十一8-羥基(脫氧)鳥(niǎo)嘌呤Elisa
氧化微桿 14-疊氮-3,6,9,12-四氧十四烷可溶性血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2Elisa
微小毛霉 3,6-二氨基咔唑肌肉肌酸激Elisa
番茄枯萎病 檸檬酸二氫可溶性血小板膜糖蛋白ⅥElisa
擬青霉 (乙)[(2-聯(lián)苯)二叔丁基膦]六氟銻酸金(I)雄酮Elisa
淡紫擬青霉 Benazepril HCl序列相似家族150成員AElisa
豇豆慢生根瘤 C5-18-全氟烷腺嘌呤核苷酸Elisa
尖孢鐮刀 3-氯-2,6-二氟苯GFAP的降解產(chǎn)物Elisa
聚生殼 Fmoc-Phe-OPfpⅠ型質(zhì)膜蛋白Elisa
黃瓜枯萎 Fmoc-Pro-OPfp腦膜炎奈瑟IgM抗體Elisa
枯草芽孢桿 Fmoc-Gly-OPfp活性氮簇Elisa