產(chǎn)品屬性:
中文名稱:Annexin V-APC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
英文名稱:Annexin V-APC Apoptosis Detection Kit
產(chǎn)品規(guī)格:10T|20T|50T|100T
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
在正常細(xì)胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè),而在細(xì)胞凋亡早期,細(xì)胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V 是一種分子量為35~36kD 的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,與磷脂酰絲氨酸有高度親和力,故可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V 被作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。將Annexin V 進(jìn)行熒光素APC 標(biāo)記,以標(biāo)記了的Annexin V 作為熒光探針,利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。\ 本試劑盒可應(yīng)用于培養(yǎng)細(xì)胞凋亡檢測(cè)(不推薦用于檢測(cè)組織樣本)。 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究?jī)?nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)英文名稱:Tn-Ⅰ ELISA Kit酪轉(zhuǎn)抗體包裝5g
肌鈣蛋白Ⅰ(cTnⅠ)英文名稱:cTnⅠ ELISA Kit抗利尿激/血管升壓/加壓/血管加壓抗體包裝25g
饑餓激(GHRL)英文名稱:GHRL ELISA KitATP結(jié)合盒蛋白家族GCN20F家族1抗體包裝5g
活性氧(ROS)英文名稱:ROS ELISA Kit糖還原抗體包裝1g
活化B(ACV-B)英文名稱:ACV-B ELISA Kit人血清白蛋白抗體包裝5g
活化A(ACV-A)英文名稱:ACV-A ELISA Kit抗體(采用活疫苗制備)包裝10MG
活化蛋白C(APC)英文名稱:APC ELISA Kit活化轉(zhuǎn)錄因子4抗體包裝5g
黃體生成釋放激(LHRH)英文名稱:LHRH ELISA Kit腺苷激-1抗體包裝1g
黃體生成(LH)英文名稱:LH ELISA Kit纖維狀肌動(dòng)蛋白抗體包裝250mg
環(huán)磷腺苷(cAMP)英文名稱:cAMP ELISA Kit聚集蛋白抗體包裝1g
環(huán)磷鳥苷(cGMP)英文名稱:cGMP ELISA Kit調(diào)亡誘導(dǎo)因子抗體包裝1g
環(huán)加氧2(COX-2)英文名稱:COX-2 ELISA Kit調(diào)亡誘導(dǎo)因子抗體包裝5g
環(huán)孢A(CsA)英文名稱:CsA ELISA Kit間變型淋巴瘤激抗體包裝25g
花生四烯5脂氧合(Alox5)英文名稱:Alox5 ELISA Kitα-基?;贵w包裝5g
花生四烯(AA)英文名稱:AA ELISA Kit膜粘連蛋白A1抗體包裝10mg
精tRNA的蛋白轉(zhuǎn)移1抗體載脂蛋白B(APOB)Dasatinib (BMS-354825)是 Bcr-Abl 和 Src 家族酪激抑制劑,抑制Abl, Src,c-Kit和c-KitD816V 的 I
Annexin V-APC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒釀酒酵母 2-(炔基)二酸二乙酯甘油三酯檢測(cè)試劑盒
黃溶鏈霉 4-氯嘧啶鹽酸鹽肝癌衍生生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒
大豆慢生根瘤 三(1,3-二苯基-1,3-二酮基)(1,10-鄰二氮雜菲銪(Ⅲ)肝配蛋白B3檢測(cè)試劑盒
食砜節(jié)桿 4-乙?;交酋B雀嗡剌o因子Ⅱ檢測(cè)試劑盒
雷公藤糖多孢 3-氨甲酸甲酯鹽酸鹽肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒
黑根霉 4,5,6-三氯嘧啶肝癌結(jié)合蛋白TD26檢測(cè)試劑盒
大豆慢生根瘤 Fmoc-D-4-氟苯氨酸肝核因子4α檢測(cè)試劑盒
副豬嗜血桿 2,4-二(二氟甲基)苯肝生長(zhǎng)因子檢測(cè)試劑盒
草木樨中華根瘤 四丁基單醋酸鏻肝生長(zhǎng)因子受體檢測(cè)試劑盒
克雷伯氏桿 1-金剛烷肝脂肪酸結(jié)合蛋白檢測(cè)試劑盒
彎頭曲霉 3-甲氧基-4-氨基苯甲肝脂肪酸結(jié)合蛋白檢測(cè)試劑盒
靈芝 五氮化三磷肝脂酶檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)紫青霉 2-(4-溴苯基)-1H-咪唑干擾素調(diào)節(jié)因子檢測(cè)試劑盒
東方伊薩酵母 雨蛙素干擾素調(diào)節(jié)因子4檢測(cè)試劑盒
大豆慢生根瘤 2,5-二氯吡啶-3-甲干擾素調(diào)節(jié)因子5檢測(cè)試劑盒
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)