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詳細介紹
商品介紹：
產(chǎn)品背景： 細胞凋亡是細胞的基本特征之一，它在機體的胚胎發(fā)育、組織修復、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過程等方面起著十分重要的作用。 在正常細胞中，磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細胞膜脂質雙層的內(nèi)側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側翻向外側。在體內(nèi)，巨噬細胞可以識別翻轉到細胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應，而在細胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應。 AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的PS 高親和力特異性結合。PS 外翻發(fā)生在細胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關蛋白出現(xiàn)之前，這使得Annexin V 與PS的結合成為凋亡早期的一種重要檢測標志事件。 檢測原理： 在正常的活細胞中，磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine，PS)位于細胞膜的內(nèi)側，但在早期凋亡的細胞中，PS 從細胞膜的內(nèi)側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環(huán)境中。 Annexin-Ⅴ能與PS 高親和力結合?？赏ㄟ^細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。用標記了APC的AnnexinⅤ作為熒光探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發(fā)生。細胞壞死的過程中也會發(fā)生細胞膜損傷，壞死的細胞會結合Annexin V-APC。 Annexin V-APC 通常與細胞膜非滲透性核酸熒光染料聯(lián)合使用以檢測凋亡細胞。常用的染料是7-AAD。正常細胞和早期凋亡細胞的細胞膜是完整的，核酸染料7-AAD 不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和壞死細胞，7-AAD 能夠透過細胞膜與細胞核結合呈現(xiàn)紅色。 7-AAD/Annexin V-APC試劑盒將Annexin Ⅴ與7-AAD匹配使用，可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞以及死細胞區(qū)分開來。壞死細胞可以同時與Annexin V-APC和7-AAD 結合顯色，而7-AAD 則被排除在活細胞(APC陰性)和早期凋亡細胞(APC陽性)之外。在沒有巨噬細胞的情況下，凋亡的后階段會像細胞壞死一樣發(fā)生整個細胞的解體，從而使凋亡晚期的細胞也同時被APC和7-AAD 結合染色呈現(xiàn)雙陽性。 儲存條件：染色液2-8℃避光保存；結合液2-8℃保存；長期不用-20℃保存。 Annexin V-APC染色液避免反復凍融，凍融2次以上可能會失效。長期保存分裝后-20℃保存。 有效期：一年。 |
產(chǎn)品屬性：
中文名稱：Annexin V-APC/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：50T|100T
發(fā)貨周期：1～3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
細胞生物學研究有以下幾個方面：
細胞生物學的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括：
①細胞核、染色體以及基因表達的研究；
②生物膜與細胞器的研究；
③細胞骨架體系的研究；
④細胞增殖及其調控；
⑤細胞分化及其調控；
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細胞的起源與進化；
⑧細胞工程.
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
格列齊特英文名稱： Mizolastine先天性紅生成異常性貧血蛋白1抗體包裝100ml
磺丁脲英文名稱： Mycophenolate Mofetil癌胚抗原相關粘附分子16抗體包裝25ml
米格列英文名稱： Mycophenolate Mofetil癌胚抗原相關粘附分子21抗體包裝100g
米格列奈鈣英文名稱： Nelarabine貓眼綜合征染色體候選基因5抗體包裝25g
瑞格列奈英文名稱： Nesiritide AcetateCUE結構域蛋白1抗體包裝5g
特力利汀;氫替格列汀英文名稱： Netilmicin Sulfate卷曲螺旋結構域蛋白52抗體包裝1g
鹽二雙胍英文名稱： Netilmicin Sulfate補體片段C3c抗體包裝5g
(+)-（標準品）英文名稱： Nystatin卷曲螺旋結構域蛋白68抗體(皮膚T淋巴淋巴瘤相關抗原)包裝5MG
(+)2-基?。藴势罚┯⑽拿Q： Olanzapine卷曲螺旋結構域蛋白83抗體包裝1g
(+/-)-兒茶精（標準品）英文名稱： Olanzapine卷曲螺旋結構域蛋白21抗體包裝5g
(S)-(+)-（普瑞巴林雜質）（標準品）英文名稱： Ondansetron HCl卷曲螺旋結構域蛋白6抗體(狀狀腺癌編碼蛋白)包裝25g
1,4-對醌（標準品）英文名稱： Ondansetron HCl周期依賴激2相關蛋白2抗體包裝5g
1-基海因鹽鹽（標準品）英文名稱： Ornidazole1號染色體開放閱讀框201抗體包裝100mg
1-基海因（標準品）英文名稱： Ornidazole卷曲螺旋結構域蛋白7抗體包裝25g
10％A晶型咪唑英文名稱： Oxaliplatin卷曲螺旋結構域蛋白80抗體包裝5g
酚節(jié)桿菌Arthrobacter│chlorophenolicus 質量規(guī)格：>99%,BR,可用于培養(yǎng)血小板衍生生長因子BB試劑盒野百合堿;Monocrotaline
副豬嗜血桿菌Haemophilus│parasuis 質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品血小板衍生生長因子AA試劑盒鹽育亨賓;Yohimbine hydr
: AS4.360資源名稱: 燼灰鏈霉菌 質量規(guī)格：>99.0%,培養(yǎng)級血小板型磷果糖激試劑盒巖白菜;Bengenin
Annexin V-APC/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒鐮孢霉 2-硝基-4-異苯O-6-甲基鳥嘌呤DNA甲基轉移Elisa
漏斗狀側耳（鳳尾菇） 茴香酸乙酯O-6-甲基鳥嘌呤DNA甲基轉移Elisa
貝爾氏屬 3-氨基-5-噻吩-2-羧酸甲酯DNA甲基化轉移1Elisa
類黃假單胞 甲基酸頻哪酯DNA甲基化轉移2Elisa
葡萄座腔 2-氟-6-三氟甲基吡啶DNA甲基化轉移3AElisa
粗糙脈孢 4-溴-3-氟DNA甲基化轉移3BElisa
喜堿運動節(jié)桿 5-氯色鹽酸鹽基質金屬蛋白抑制因子4Elisa
蠟樣狀芽孢桿 2,5-二氯-3-吡啶內(nèi)質網(wǎng)核心信號1Elisa
豬放線桿 3-三氟甲基-5-甲基吡唑傷寒抗原Elisa
膜醭畢赤酵母 N-苯基馬來酰亞抗磷酸5bElisa
蘇云金芽胞桿 2,3-二氨基-6-甲氧基吡啶鹽酸鹽甲狀旁腺134Elisa
羊肚伴生 4-甲基-5-噻唑基乙己酸酯氨基端前心鈉肽Elisa
黃棕色鏈霉 4-甲基-5-噻唑基乙丁酸酯含卷曲螺旋域蛋白49Elisa
德爾布有孢酵母 N--3,4-亞甲二氧基苯鹽酸鹽酮酸脫氫Elisa
乳桿 1-甲基-3-苯基硫酸酚Elisa
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