以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
細(xì)胞膜染色試劑盒是用一種親脂性的綠色熒光探針進(jìn)行細(xì)胞膜染色。染色液O 進(jìn)入細(xì)胞膜后,在整個細(xì)胞膜上擴(kuò)散,佳濃度時可以使整個細(xì)胞膜染色。染色液O在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱,當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng),被激發(fā)后可以發(fā)出綠色的熒光,具有很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命??梢杂脴?biāo)準(zhǔn)的FITC濾光片檢測。 染色液O 通常不會明顯影響細(xì)胞的活力,因此被廣泛用于正向或逆向的,活的或固定的神經(jīng)等細(xì)胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑(long-term tracer)。除了簡單的細(xì)胞膜熒光標(biāo)記外,還可以用于檢測細(xì)胞的融合和粘附,檢測發(fā)育或移植過程中細(xì)胞遷移,通過FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)檢測脂在細(xì)胞膜上的擴(kuò)散,檢測細(xì)胞毒性和標(biāo)記脂蛋白等。 儲存條件:4℃避光保存。長期保存-20℃避光保存。 有效期:六個月。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
雷公藤內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tantalum standard磷化gamma基丁B型受體1抗體包裝100mg
雷公藤內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: lurium standard磷化谷受體2抗體包裝25g
雷公藤寧堿A英文名稱: Terbium standard磷化鳥苷調(diào)節(jié)蛋白12抗體包裝5g
雷公藤乙(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Vanadium solution珠蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體包裝10g
類葉升麻苷,毛蕊花糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Yttrium standard過氧化3包裝1g
藜蘆英文名稱: Zinc standard過氧化4抗體包裝1g
里卡靈A英文名稱: Zinc standard高爾基體膜蛋白GP73抗體包裝5g
利卡靈-B;利卡靈B英文名稱: Vamidothion standard solutionG蛋白偶聯(lián)受體172B抗體包裝1g
利血平(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Vacuum pump oil生發(fā)中心B淋巴相關(guān)蛋白2抗體包裝1g
櫟櫻(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Vacuum pump oilG蛋白轉(zhuǎn)錄因子α3抗體包裝5g
連錢草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Vacuum pump oilG蛋白偶聯(lián)受體124抗體(腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)記物)包裝10ml
連翹(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Vacuum pump oil半乳糖凝集1抗體包裝50ml
連翹苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Violuric acid monohydrateα葡萄糖苷2抗體包裝25g
連翹酯苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Vitamin E acetate半乳糖凝集7抗體包裝25g
連翹酯苷B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Uniconazole特異性囊腫病液體蛋白15抗體包裝5g
: LMG20263=DSM40172=ATCC19805=ATCC19921=CBS5資源名稱: 玫瑰暗黃鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品羥基戊二單酰還原試劑盒牡荊內(nèi)酯;Vitexilactone
44409T資源名稱: Amycolatopsis keratiniphila subsp. keratiniphila 質(zhì)量規(guī)格:>99%羥基戊二單酰試劑盒毛地黃;Digitaline
傳染性喉氣管炎病毒Alphaherpesvirinae│Infectious laryngotracheitis virus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品羥基賴正己試劑盒麥芽糖;Maltose
細(xì)胞膜染色試劑盒(綠色熒光)-M01閃光須霉 醋酸磺米隆CC趨化因子配體23Elisa
金灰青霉 5-溴-4-氯-3-辛酯辣椒Elisa
紅曲紅曲 1-羥基蒽醌速激肽Elisa
分枝卷霉 (S)-(+)-聯(lián)萘酚二對甲苯磺酸酯唇腭裂跨膜蛋白1樣蛋白Elisa
溶藻弧 3-(甲氨基)6磷酸果糖激1Elisa
豇豆慢生根瘤 1,3,5-三(N,N-二苯基氨基)苯防御α1Elisa
豬鏈球 4-甲基-3-氧代-N-苯基-2-(苯甲烯基)戊酰骨成型蛋白Elisa
成團(tuán)泛 (1,5-環(huán)辛二烯)二鉑(II)可溶性甘露糖結(jié)合凝集2Elisa
孟氏假單胞 Prussian blue soluble膜受體蛋白Elisa
屎腸球 2-溴-4,5,6-三氟苯網(wǎng)狀蛋白4Elisa
硬結(jié)節(jié)桿 三(4 -甲氧基- 3 ,5 -二甲苯基)膦網(wǎng)狀蛋白4BElisa
Massilia dura (R,R)-N,N'-雙(三氟磺酰)-1,2-二苯基乙二含主要協(xié)助轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白超家族域蛋白2AElisa
宇佐美曲霉 阿侖膦酸鈉NDUFB4Elisa
中慢生華癸根瘤 2,3-二氟苯乙NDUFB8Elisa
島生坂野酵母 硒化銦(III)磷酸化過氧化物體增殖因子活化受體γElisa