以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
用途: 適用于細(xì)胞染色,也用于莢膜組織胞漿菌、馬爾尼菲青霉菌等染色。 注意事項(xiàng): 主要由瑞氏色素、吉姆薩色素混合液、磷酸鹽緩沖液組成,染色特點(diǎn)是細(xì)胞形態(tài)完整,對(duì)于侵襲性感染標(biāo)本直接涂片染色較佳。 儲(chǔ)存條件:室溫,24個(gè)月 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
布南色林英文名稱: Nystatin配對(duì)盒基因9抗體包裝1g
雌莫司汀磷鈉英文名稱: SULBENICILLINP-鈣粘附分子抗體包裝5g
醋唑英文名稱: Acetylspiramycin腺苷環(huán)化激活肽-38抗體包裝100mg
醋磺米英文名稱: Potassium trichloroammineplatinate(II)腫瘤抑制基因P53蛋白抗體(野生型P53)包裝5g
醋優(yōu)力司特;醋烏利司他英文名稱: Sisomicin腫瘤抑制基因p63α抗體包裝100mg
醋增血壓英文名稱: spectinomycin磷二酯4A8抗體包裝100g
地克珠利英文名稱: 5-MTHF;5-Methyltetrahydrofolic Acid Calcium Salt Trihydrate血小板源性生長(zhǎng)因子AB+BB抗體包裝25g
地拉考昔英文名稱: Kitasamycin增殖核抗原抗體包裝100g
地拉羅司,去鐵斯若英文名稱: josamycin腦特異性多肽蛋白19抗體包裝25g
地馬格列英文名稱: Midecamycin Acetate三磷腺苷門控陽(yáng)離子通道蛋白抗體包裝5g
地美司鈉英文名稱: Etimicin硫氧還蛋白過(guò)氧化物Ⅱ/巰基抗氧化蛋白抗體包裝1g
地美溴英文名稱: Paromomycinp53凋亡相關(guān)作用蛋白PMP22抗體包裝250mg
地瑞那韋乙鹽英文名稱: Teicoplanin 磷核糖咪唑羧化抗體包裝100g
地塞米松環(huán)氧解物英文名稱: Nystatin神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體抗體包裝25g
度骨化英文名稱: Inosine 5'-Monophosphate(IMP)腫瘤錯(cuò)配修復(fù)基因PMS1抗體包裝1g
核盤菌Sclerotinia│sclerotiorum 質(zhì)量規(guī)格:>60%,BR活化凝血因子X(jué)試劑盒白頭翁皂苷B4;Anemoside B4
青紫黑鏈霉菌Streptomyces│glaucovioatratus 質(zhì)量規(guī)格:>95%活化凝血因子Ⅻ試劑盒畢靈堿;(+)-Bicucullin
聚多曲霉Aspergillus│sydowii 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定活化蛋白C試劑盒斑蝥;Cantharidin
瑞氏-姬姆薩復(fù)合染色液光陽(yáng)微泡 (R)-(-)-2-對(duì)甲苯磺酸-1-苯基-1,2-乙二谷氨酸-天冬氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體Elisa
球孢白僵 2-苯甲基溴α7型神經(jīng)煙堿能受體Elisa
杏鮑菇 2,4,6-基芐α7型神經(jīng)煙堿能受體Elisa
枯草芽孢桿枯草亞種 2--3,5-二溴吡啶過(guò)氧化氫Elisa
枝彎孢 6-氟煙酸球蛋白Elisa
圓酵母屬 4'-氟苯乙酮白喉IgG抗體Elisa
蘋果輪紋病 1-二苯甲基氮雜環(huán)丁烷-3-酮二肽基肽ⅣElisa
小單孢 3-氟-4-甲氧基豆莢蛋白Elisa
鼠傷寒沙門氏 4-氟-3-甲基-胱抑Elisa
栗疫 6-氟-2-甲基白介37Elisa
假單胞 2,4,6-三金屬蛋白Elisa
利古里亞游動(dòng)放線 2-氨基噻唑-5-甲酸內(nèi)源性糖皮質(zhì)Elisa
釀酒酵母 3-甲基吡唑-5-甲酸乙酯NeuroD1Elisa
豬布魯氏 2-溴-3-氟吡啶血清蛋白Elisa
蠟狀芽孢桿 2--3-羥基吡啶巨噬激蛋白Elisa