商品介紹:
BCIP/NBT 堿性磷酸酯酶顯色試劑盒是一種用于免疫組化顯色、Western 等膜顯色和誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞iPS 鑒定等的試劑盒。 BCIP/NBT 是堿性磷酸酯酶的常用底物。在堿性磷酸酯酶的催化下,BCIP 會被水解產(chǎn)生強(qiáng)反應(yīng)性的產(chǎn)物,該產(chǎn)物會和NBT 發(fā)生反應(yīng),形成不溶性的深藍(lán)色至藍(lán)紫色的NBT-formazan。 本試劑盒可以用于細(xì)胞或組織的堿性磷酸酯酶顯色包括誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞iPS 的鑒定,也可以用于Western 等結(jié)合有堿性磷酸酯酶的膜的顯色檢測。同時也可以用于細(xì)胞或組織內(nèi)源性的堿性磷酸酯酶顯色。 組份規(guī)格: 試劑A:堿性磷酸酯酶顯色緩沖液 100ml 試劑B:BCIP 溶液(300X) 350μl 試劑C:NBT 溶液(150X) 700μl 使用說明 1. 對于組織切片或細(xì)胞樣品或膜,在與堿性磷酸酯酶標(biāo)記的抗體或其它形式的探針孵育后,用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5 次,每次3-5 分鐘。對于檢測內(nèi)源性堿性磷酸酯酶的組織或細(xì)胞樣品,在適當(dāng)固定后,也用適當(dāng)洗滌液洗滌3-5 次,每次3-5 分鐘。 2. 按照如下比例依次加入各溶液,混勻后即配制成BCIP/NBT 染色工作液,配方如下:試劑A:堿性磷酸酯酶顯色緩沖液 3mL試劑B:BCIP 溶液(300X) 10μL試劑C:NBT 溶液(150X) 20μL染色工作液總體積:3.03mL 3. 后一次洗滌完畢后,去除洗滌液,加入適量BCIP/NBT 染色工作液,確保能充分覆蓋樣品。 4. 室溫避光孵育5-30 分鐘或更長時間(可長達(dá)24 小時),直至顯色至預(yù)期深淺。 5. 去除BCIP/NBT 染色工作液,用蒸餾水洗滌1-2 次即可終止顯色反應(yīng)。 6. 對于組織切片或細(xì)胞樣品,顯色反應(yīng)終止后,如有必要可以用中性紅染色液(neutral red staining solution)染色,以便于觀察。對于膜,顯色反應(yīng)終止后,可以室溫晾干避光保存。 儲存:4℃,有效期一年。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
BCIP/NBT堿性磷酸酯酶顯色試劑盒 | BCIP/NBT Alkaline Phosphatase Color Development Kit | 共100ml | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
制霉菌(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sodium chloride鐵螯合抗體包裝1g
制霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Guanidine hydrochlorideDH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體包裝1g
重長春瑞賓(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Adonitol磷化絲裂原活化蛋白激1/2抗體包裝5g
重腎上腺(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Yeast extract上皮粘附分子抗體包裝1g
周效磺(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: RNase A Solution酪蛋白激受體B2抗體包裝5g
注射用益氣復(fù)脈隨行對照品(暫行)英文名稱: D-Glucose, monohydrate表皮生長因子抗體包裝1g
壯觀霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: SDS表皮生長因子受體3抗體包裝5g
子囊霉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: PEG 6000酪蛋白激A4受體抗體包裝1g
組(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tween 20上皮鈣粘附分子抗體包裝5g
左卡尼?。?biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Triton X-100紅生成受體抗體包裝1g
左羥哌(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tryptone腦啡肽抗體包裝5g
左旋地平/磺左旋地平(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: D-BiotinEID2蛋白抗體包裝25ml
左旋奧沙利鉑(奧沙利鉑雜質(zhì)D)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Glycerol上皮粘附分子抗體包裝500ml
左旋(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sodium citrate, trisodium salt, dehydrate紅膜相關(guān)蛋白ERMAP抗體包裝100g
左氧沙星(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Gelatin腺樣癌特異性相關(guān)抗原EMC1抗體包裝500g
竹瘤座菌Balansia│take (Miyake) Hara 質(zhì)量規(guī)格:含量98.0-102%,I型糖蛋白130試劑盒三七總皂苷;Panax notogins
纖細(xì)白僵菌Beauveria│brongniartii (Sacc.) Petch 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP32羰基還原[NADPH] 1試劑盒SN-38;7-Ethyl-10-Hyd
禽分枝桿菌Mycobacterium│avium 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品碳酐9試劑盒楊苷;Salicoside
BCIP/NBT堿性磷酸酯酶顯色試劑盒枯草芽孢桿 3-三氟甲基肉桂Kruppel樣因子7Elisa
米曲霉 烯基氯化鎂(的四溶液,約1mol/L)甲胎蛋白異質(zhì)體2Elisa
巨型艾美耳球蟲 吩惡噻空腹血糖Elisa
耐輻射奇球 3,4-亞甲二氧芐基空腹胰島Elisa
云南紅球?qū)?/span> 氧鈦酞菁核基質(zhì)蛋白22Elisa
枯草芽孢桿 10H-吡啶并(3,2-b)(1,4)苯并噻酮還原1-B10Elisa
食油假單胞 3,4,5-三氟苯基氨酸14,15-環(huán)氧化二十碳Elisa
葉點(diǎn)霉 2-甲基-3-(三氟甲基)芐基溴狀瘤病16型IgG抗體Elisa
青霉 3-氟-4-乙酸狀瘤病18抗體IgGElisa
蘇云金芽孢桿 3-氟-4-乙同型半胱氨酸硫內(nèi)酯Elisa
中慢生根瘤 3-氟-4-肝脂肪酸結(jié)合蛋白Elisa
大橋村鹽單胞 5'-氯-5'-脫氧腺苷水合物表面膜球蛋白DElisa
大腸埃希氏桿 (4-氟-3-基)甲激動異構(gòu);分裂MBElisa
香菇11 4-氟-3-甲酰黑色I(xiàn)gG抗體Elisa
加利福尼亞擬威爾酵母 5-氨基-2,4-二氟三氟甲苯黑色I(xiàn)gM抗體Elisa