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胎兒彎曲桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒反應(yīng)五要素
閱讀:175 發(fā)布時(shí)間:2022-3-31胎兒彎曲桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列*有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
活化轉(zhuǎn)錄因子4抗體
腺苷酸激酶-1抗體
纖維狀肌動(dòng)蛋白抗體
聚集蛋白抗體
調(diào)亡誘導(dǎo)因子抗體
調(diào)亡誘導(dǎo)因子抗體
間變型淋巴瘤激酶抗體
膜粘連蛋白A1抗體
自噬相關(guān)蛋白1抗體
β淀粉樣肽1-16/Aβ1-16
銜接因子蛋白含pH域蛋白1抗體
水通道蛋白-7抗體
谷丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶1抗體
p21活化蛋白激酶ARHG7抗體
磷酸化肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白Girdin抗體
2-氨基乙硫醇雙加氧酶抗體
血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體
腺苷A2b受體/神經(jīng)生長(zhǎng)因子1受體抗體
去整合素樣金屬蛋白酶19抗體
原癌基因AF4蛋白抗體
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶樣1蛋白抗體
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶樣2蛋白抗體
整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶樣3蛋白抗體
去整合素樣金屬蛋白酶20抗體