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干細(xì)胞的原理
閱讀:363 發(fā)布時(shí)間:2017-9-28干細(xì)胞原理:
轉(zhuǎn)化(Transformation ):將外源DNA 分子引入受體細(xì)菌,使之獲得新的遺傳性狀。
受體細(xì)菌一般是限制修飾系統(tǒng)缺陷的變異株,不含限制性內(nèi)切酶 和甲基化酶的突變體(R-,M-),可以容忍外源DNA 分子進(jìn)入體內(nèi)并穩(wěn)定地遺傳給后代。受體細(xì)胞經(jīng)過一些特殊方法,如電擊或CaCl2 、RbCl/KCl等化學(xué)試劑的處理后,細(xì)胞膜的通透性增高,成為感受態(tài)細(xì)胞(Compenent cells),使外源DNA 分子得以進(jìn)入。
目前常用的感受態(tài)細(xì)胞制備方法有CaCl2 和RbCl/KCl法,RbCl/KCl法制備的感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率較高,但CaCl2 法簡(jiǎn)便易行,且其轉(zhuǎn)化效率*可以滿足一般實(shí)驗(yàn)的要求,制備出的感受態(tài)細(xì)胞暫時(shí)不用時(shí),可加入無菌甘油至總體積15%,于-70℃保存半年之久,因此CaCl2 法為使用更廣泛。
準(zhǔn)備:
1、配制0.05mol/L CaCl2 -15%甘油混合溶液,高溫高壓滅菌;
注: CaCl2 必須為分析純以上。
2、實(shí)驗(yàn)中所需的所有試管 、培養(yǎng)瓶 、離心管 等均要用去離子水*清洗干凈,高溫高壓滅菌;
注: 有制備感受態(tài)細(xì)菌的一套實(shí)驗(yàn)器材。
3、受體菌的培養(yǎng):干細(xì)胞從非選擇性LB平板上挑取E.coli單菌落,接種于3-5ml LB液體培養(yǎng)基中,37℃振蕩培養(yǎng)過夜至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中后期。將該菌懸液以1:100的比例接種于50~100ml LB液體培養(yǎng)基中,37℃振蕩培養(yǎng)2.5小時(shí)至OD600 =0.5。注:培養(yǎng)時(shí)間不宜超過2.5小時(shí),否則不能達(dá)到轉(zhuǎn)化效率。
產(chǎn)品名稱: Anti-Cdc2/P34CDC2/CDK1 規(guī)格: 0.1ml 周期素依賴激酶1抗體
產(chǎn)品名稱: Anti-Cdc34 規(guī)格: 0.1ml 細(xì)胞周期調(diào)控因子34
產(chǎn)品名稱: Anti-Cdc6 規(guī)格: 0.1ml 細(xì)胞分裂周期蛋白6抗體
產(chǎn)品名稱: Anti-CDK1 規(guī)格: 0.1ml 周期素依賴性激酶1抗體
產(chǎn)品名稱: Anti-CDK2 規(guī)格: 0.1ml 周期素依賴性激酶2抗體
產(chǎn)品名稱: Anti-CDK3 規(guī)格: 0.1ml 周期素依賴性激酶3抗體
產(chǎn)品名稱: Anti-CDK4 規(guī)格: 0.1ml 周期素依賴性激酶4抗體
產(chǎn)品名稱: Anti-CDK5 規(guī)格: 1ml 周期素依賴性激酶5抗體
產(chǎn)品名稱: Anti-CDK6 規(guī)格: 0.2ml 周期素依賴性激酶6抗體
干細(xì)胞