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1.轉(zhuǎn)化細(xì)胞清洗

(1)玻璃器皿的清洗

步驟：按浸泡→刷洗→浸酸→沖洗等四步程序進(jìn)行。

①浸泡：新購進(jìn)的玻璃器皿常帶有灰塵，呈弱堿性，或帶有鉛、碑等有害物質(zhì)，故先用自來水浸泡過夜、水洗，然后再用2%~5%鹽酸浸泡過夜或煮沸30min，水洗。要領(lǐng)：培養(yǎng)用后的玻璃器皿要立即泡入清水中，使下道刷洗工作能順利進(jìn)行。用后的玻璃器皿常帶有大量的蛋白質(zhì)附著，干涸后不易刷洗掉，用后要立即用清水浸泡。

②刷洗：用軟毛刷、洗滌劑，刷去器皿上的雜質(zhì)，沖洗晾干。要領(lǐng)：浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗滌劑去器皿上的雜質(zhì)、刷洗次太多，會損害器皿的表面光潔度，洗滌劑有使pH上升的趨勢，所以易選用軟毛刷和洗滌劑。禁止用去污粉。因其中含有砂粒。會嚴(yán)重破壞玻璃器皿的光潔度。特別注意刷洗瓶角部位。酸浸之前要把洗滌劑沖干凈。

③浸酸：將器皿浸泡于清潔液24h，如急用也不得少于4h。清潔液由重鉻酸鉀、濃硫酸及蒸餾水配制而成，具有很強(qiáng)的氧化作用，去污能力很強(qiáng)。經(jīng)清潔液浸泡后，玻璃器皿殘留的末刷洗掉的微量雜質(zhì)可被*清除。

④沖洗：先用自來水充分沖洗，吸管等沖流10min，瓶皿需每瓶灌滿、倒掉，反復(fù)10次以上。然后再經(jīng)蒸餾水漂洗3次,不留死角。晾干或烘干備用。對已用過的器皿，凡污染者必先經(jīng)煮沸30min或放3%鹽酸中浸泡過夜，未污染者可不需滅菌處理，但仍要刷洗、清潔液浸酸過夜，沖洗等。

矽酸鈉洗液

貯存液(×100)

砂酸納80克加偏磷酸鈉9克加熱溶在1000ml水中。使用時用水稀釋100倍，將器皿放入煮沸20min，冷卻后沖洗，再用2%HCl浸泡2h后，自來水沖洗。矽酸鈉洗液較清潔液安全，但價格較貴。

(2)轉(zhuǎn)化細(xì)胞塑料器皿清洗

自來水充分浸泡→沖洗→2%Na0H浸泡過夜→自來水沖洗→2%~5%鹽酸浸泡30min→自來水沖洗→蒸餾水漂洗3次 →晾干→紫外線照射30min(或先用75%酒精浸泡、擦拭，再用紫外線照射30min)。凡能耐熱的塑料器皿，經(jīng)101.3kPa(121.3℃)高壓滅菌。

(3)膠塞等橡膠類處理

新購置者先經(jīng)自來水沖洗→2%NaOH煮沸15min→ 自來水沖洗→2%~5%HCl煮沸15min→ 自來水沖洗5次以上→蒸餾水沖洗5次以上→ 蒸餾水煮沸10min，倒掉沸水讓余熱烘干瓶塞等。或蒸餾水沖洗晾干，整齊擺放于小型金屬盒內(nèi)經(jīng)101.3kPa高壓滅菌。

(4)金屬器械的清洗

新購進(jìn)的金屬器械常涂有防銹油，先用沾有汽油的紗布擦去油脂，再用水洗凈，zui后用酒精棉球擦拭，晾干。用過的金屬器械應(yīng)先以清水煮沸消毒，再擦拭干凈。使用前以蒸餾水煮沸10min，或包裝好以101.3kPa高壓15min。

(5)除菌濾器的處理

用過的濾器將濾膜去除，用三蒸水充分洗凈殘余液體，置干燥箱中烘干備用。

2.包裝

包裝的目的是防止消毒滅菌后再次遭受污染，所以經(jīng)清洗烤干或晾干的器材，應(yīng)嚴(yán)格包裝后再行消毒滅菌處理。包裝材料常用包裝紙、牛皮紙、硫酸紙、棉布、鋁飯盒、玻璃或金屬制吸管筒、紙繩等。包裝分為局部包裝和全包裝兩類，前者用于較大瓶皿，一般用硫酸紙和牛皮紙將瓶口包扎好;后者適于較小培養(yǎng)瓶皿、吸管、注射器、金屬器械和膠塞等，以下為常用瓶皿、吸管、無菌衣帽等的包裝方法，其它物品可參照處理。

①瓶類：硫酸紙罩以瓶口,外罩二層牛皮紙用繩扎緊。

②小瓶皿、膠塞、刀剪等器械可裝人飯盒，飯盒再以牛皮紙包好，繩扎好。

③吸管、滴管口用脫脂棉塞上(不要太緊或太松)裝人消毒筒內(nèi)，濾器、濾瓶、橡皮管等都要用牛皮紙包好瓶口等，外罩一層牛皮紙包好，再用包布包好。

④無菌衣、帽、口罩，均以牛皮紙或包布包好，繩扎好。

3.消毒滅菌

嚴(yán)格的消毒滅菌對保證細(xì)胞培養(yǎng)的成功是極為重要的，其方法分為物理法和化學(xué)法兩類。前者包括干熱、濕熱、濾過、紫外線及射線等，后者主要指使用化學(xué)消毒劑等。

①熱滅菌：玻璃器皿，160~170℃，90~120min或180℃45~60min。

②蒸氣滅菌：用于玻璃器皿、濾器橡膠塞、解剖用具、耐熱塑料器具、受熱不變性的溶液等，不同物品其有效滅菌壓力和時間不同，如培養(yǎng)用液、橡膠制品、塑料器皿等用68kPa(115℃)高壓滅菌10min;布類、玻璃制品、金屬器械等用103kPa(121.3℃)高壓滅菌15~20min。

③濾過除菌：適于含有不耐熱成分的培養(yǎng)基和試劑的除菌，用孔徑為0.22μm微孔濾膜可除去細(xì)菌和霉菌等，用此濾膜過濾兩次，可使支原體達(dá)到某種程度的去除，但不能除去病毒。

④紫外線：紫外線的波長為200~300nm，zui強(qiáng)是在254 nm，6~15平方米zui少一只紫外燈，高度要在2.5m以下，濕度45%~60%，桿菌效果好，球菌次之，霉菌、酵母菌zui差，實驗前應(yīng)不低于30分鐘的照射時間。

⑤熏蒸消毒：當(dāng)遇有細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)多次污染，或?qū)嶒炇覂蓚€月一次的常規(guī)消毒，均可用高錳酸鉀5~7.5g，加甲醛(40%)10~15ml，混合放入一開放容器內(nèi)，立即可見白色甲醛煙霧，消毒房間需封閉24小時，致少4小時以上。

⑥煮沸消毒：緊密情況時使用，金屬器械和膠蹇在水中煮20~30分鐘，趁熱傾去水分即可使用。

⑦轉(zhuǎn)化細(xì)胞化學(xué)消毒：化學(xué)藥品消毒滅菌法是應(yīng)用能殺死微生物的化學(xué)制進(jìn)行消毒滅菌的方法。實驗室桌面、用具及洗手用的溶液均常用化學(xué)藥品進(jìn)行消毒殺菌。常用的有：2%煤酚皂溶液(來蘇爾)、0.25%新潔爾滅、3~5%甲醛溶液、75%酒精。