正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

商品屬性：

測(cè)定意義：

磷酸戊糖途徑途徑中 6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）和 6PGDH 依次催化 NADPH 合成，與 能量的平衡、生長(zhǎng)速率和細(xì)胞活力等密切相關(guān)。此外，6PGDH 逆境生理中具有重要作用。

測(cè)定原理：

6PGDH 催化 6-磷酸葡萄糖酸和 NADP +生成 NADPH，NADPH 在 340 nm 有特征吸收峰，而 NADP +沒有；通過測(cè)定 340nm 吸光度增加速率，計(jì)算 6PGDH 活性。

自備儀器和用品：

低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、酶標(biāo)儀、96 孔板和蒸餾水。 

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 19mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存。

試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃保存。

組織樣本的前處理：

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備： 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量 （10 4個(gè)）：提取液體積（mL）為 1000~5000：1 的比例（建議 2000 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟：

1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 340 nm。

2 將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中充分溶解；在 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

3. 取 96 孔板，依次加入 10μL 樣本 190μL 試劑一，于 340nm 處測(cè)定 3min 內(nèi)吸光值變化，

第 10 s 吸光值記為 A1，第 190s 吸光值記為 A2?！?/span>A=A2-A1

注意：空白管只需要做一次。 計(jì)算公式：

使用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

1、血清（漿）6PGDH 活力的計(jì)算:

單位的定義：每 mL 血清（漿）每分鐘生成 1 nmol 的 NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

6PGDH（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷V 樣÷T=2143.6×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 6PGDH 活力的計(jì)算:

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

6PGDH（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=2143.6×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算：

單位的定義：每 g 組織每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

6PGDH（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=2143.6×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

單位的定義：每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

6PGDH（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V 樣÷V 樣總) ÷T=1.072×ΔAV 反總：反應(yīng)體系總體積，1×10

-3 L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：

96 孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.05 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，3 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；2000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，2000 萬(wàn)。

生化檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)操作說明：

一、抗氧化系列生化檢測(cè)試劑盒

包括氧化酶（XO）活性分析、超氧陰離子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性（GOD）檢測(cè)、總抗氧化能力（TAC）檢測(cè)、植物原花青素(OPC)含量檢測(cè)、植物類黃酮含量檢測(cè)、植物總酚（TP）含量檢測(cè)試劑盒。

氧化酶（XO）活性分析試劑盒為例，提供了一種簡(jiǎn)單易用的比色分析法，用于測(cè)定各種樣品中的XO活性，特點(diǎn)是測(cè)定血清，血漿，組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的氧化酶活性，以及廣泛的檢測(cè)范圍：15.6 -500 mU/mL。

二、氧化系列生化檢測(cè)試劑盒

包括過氧化氫酶 (CAT) 活性分析、過氧化氫（H2O2）檢測(cè)、脂質(zhì)過氧化(丙二醛) 分析、蛋白質(zhì)羰基含量檢測(cè)、超氧陰離子含量檢測(cè)等試劑盒。

蛋白質(zhì)羰基含量檢測(cè)試劑盒（比色法）為例，提供了一種簡(jiǎn)單易用的比色法，用于分析不同生物樣品（細(xì)胞/組織裂解液，生物液體）中蛋白質(zhì)羰基含量。在370 nm處有特征吸收峰。

特點(diǎn)是：1.測(cè)定組織樣本、細(xì)胞、細(xì)菌、血清等中的蛋白質(zhì)羰基含量。2.樣本處理、實(shí)驗(yàn)步驟以及結(jié)果計(jì)算更加詳盡準(zhǔn)確精煉。3.保質(zhì)期長(zhǎng)。

三、抗逆系列生化檢測(cè)試劑盒

包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測(cè)、羥自由基清除能力分析、多酚氧化酶（PPO）活性檢測(cè)、過氧化物酶(POD)活性檢測(cè)等試劑盒。

超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測(cè)試劑盒為例，提供一種簡(jiǎn)單易用的比色測(cè)定法，用于定量測(cè)定血清，血漿，組織/細(xì)胞裂解液和其它生物體液中的SOD酶活性。

特點(diǎn)是：1.測(cè)定血清，血漿，組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的SOD酶活性。2.通過WST-8法測(cè)定SOD活性，zui大抑制率可接近100％，不受一些常見干擾因素的干擾。3.廣泛的檢測(cè)范圍：3.13- 200U/mL。

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