NADP蘋(píng)果酸酶(NADPME)測(cè)試盒微量法的相關(guān)產(chǎn)品：丙酮酸激酶(PK)測(cè)試盒紫外分光光度法丙酮酸羧化酶(PC)測(cè)試盒微量法丙酮酸脫氫酶(PDH)測(cè)試盒微量法丙酮酸脫氫酶(PDH)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒微量法丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒紫外分光光度法

商品屬性：

測(cè)定意義：

ME 廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性較高。ME 催化蘋(píng)果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng),產(chǎn)CO2,以及伴隨 NAD(P)+的還原反應(yīng),是蘋(píng)果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME 活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來(lái)植物 ME 活性為抗氧化研究的熱點(diǎn)。根據(jù)輔酶專(zhuān)一性和對(duì)底物特異性的不同,可將 ME 分為 NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.4

測(cè)定原理:

NADP-ME 催化 NADP+還原成 NADPH,在 340nm 下測(cè)定 NADPH 增加速率。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液:100mL×1 瓶,4℃保存。;

試劑一:液體 30mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:粉劑×1 瓶,-20℃保存; 臨用前加入 20mL 試劑一充分振蕩,溶解待用,用不完的試劑分裝后-20度保存,禁止反復(fù)凍融。

試劑三:粉劑×1 瓶,-20℃保存;臨用前加入 2.5mL 蒸餾水充分振蕩,溶解待用,用不完的試劑分裝后-20度保存,禁止反復(fù)凍融。

組織樣本的前處理：

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);14000g 4℃離清,置冰上待測(cè)。

組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱(chēng)取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。14000g 4上清,置冰上待測(cè)。

2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 樣本和 170μL 試劑二,混勻,30℃孵育 5min,加入 20μL試劑三,混勻后立即記錄

光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2,計(jì)算 ΔA=A2-A1。

NADP-ME 活性計(jì)算:

a.用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADP-ME(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T= 3215×ΔA÷Cpr此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度

(2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每 g 組織每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADP-ME(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T = 3215×ΔA÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADP-ME(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T =6.43×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:NADPH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.0

提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬(wàn)。

b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADP-ME(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V 樣) ÷T= 6431×ΔA÷Cpr此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。

(2)按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每 g 組織每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADP-ME(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T = 6431×ΔA÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個(gè)酶活力單位。

NADP-ME(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣÷V 樣總×500) ÷T =12.86×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,2×10-4 L;ε:NADPH 摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol/cm;d:96 孔板光徑,0.5cm;V 樣:加入樣本體積,0

入提取液體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬(wàn)

 

 

生化檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)操作說(shuō)明：

一、抗氧化系列生化檢測(cè)試劑盒

包括氧化酶（XO）活性分析、超氧陰離子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性（GOD）檢測(cè)、總抗氧化能力（TAC）檢測(cè)、植物原花青素(OPC)含量檢測(cè)、植物類(lèi)黃酮含量檢測(cè)、植物總酚（TP）含量檢測(cè)試劑盒。

氧化酶（XO）活性分析試劑盒為例，提供了一種簡(jiǎn)單易用的比色分析法，用于測(cè)定各種樣品中的XO活性，特點(diǎn)是測(cè)定血清，血漿，組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的氧化酶活性，以及廣泛的檢測(cè)范圍：15.6 -500 mU/mL。

二、氧化系列生化檢測(cè)試劑盒

包括過(guò)氧化氫酶 (CAT) 活性分析、過(guò)氧化氫（H2O2）檢測(cè)、脂質(zhì)過(guò)氧化(丙二醛) 分析、蛋白質(zhì)羰基含量檢測(cè)、超氧陰離子含量檢測(cè)等試劑盒。

蛋白質(zhì)羰基含量檢測(cè)試劑盒（比色法）為例，提供了一種簡(jiǎn)單易用的比色法，用于分析不同生物樣品（細(xì)胞/組織裂解液，生物液體）中蛋白質(zhì)羰基含量。在370 nm處有特征吸收峰。

特點(diǎn)是：1.測(cè)定組織樣本、細(xì)胞、細(xì)菌、血清等中的蛋白質(zhì)羰基含量。2.樣本處理、實(shí)驗(yàn)步驟以及結(jié)果計(jì)算更加詳盡準(zhǔn)確精煉。3.保質(zhì)期長(zhǎng)。

三、抗逆系列生化檢測(cè)試劑盒

包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測(cè)、羥自由基清除能力分析、多酚氧化酶（PPO）活性檢測(cè)、過(guò)氧化物酶(POD)活性檢測(cè)等試劑盒。

超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測(cè)試劑盒為例，提供一種簡(jiǎn)單易用的比色測(cè)定法，用于定量測(cè)定血清，血漿，組織/細(xì)胞裂解液和其它生物體液中的SOD酶活性。

特點(diǎn)是：1.測(cè)定血清，血漿，組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的SOD酶活性。2.通過(guò)WST-8法測(cè)定SOD活性，zui大抑制率可接近100％，不受一些常見(jiàn)干擾因素的干擾。3.廣泛的檢測(cè)范圍：3.13- 200U/mL。

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