詳細(xì)介紹
反應(yīng)五要素:
大豆特定基因序列(Lectin)核酸檢測試劑盒方法參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當(dāng)于PCR 體積的1/10)作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
大豆特定基因序列(Lectin)核酸檢測試劑盒方法 | 48T | PCR檢測試劑盒 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品:
大豆特定基因序列(Lectin)核酸檢測試劑盒方法15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
5-四氮唑分子式:85.07分子量: CH3N5英文名稱:5- amino tetrazoliumCAS號(hào):4418-61-5
2,4,5-三氟硝分子式:177.08分子量: C6H2F3NO2英文名稱:2,4,5- threeCAS號(hào):2105-61-5
2-氯-6-甲吡分子式:127.57分子量: C6H6ClN英文名稱:2- -6- methyl pyridineCAS號(hào):18368-63-3
地膚子皂苷Ic英文名稱:Momordin IcCAS號(hào):96990-18-0分子式:764.93906分子量:C41H64O13
5-氯-2-甲氧吡分子式:143.57分子量: C6H6ClNO英文名稱:5- chloride -2- aCAS號(hào):13473-01-3
3-乙酰-5-溴吡分子式:200.04分子量: C7H6BrNO英文名稱:3- acetyl -5-CAS號(hào):38940-62-4
3,5-二氟三氟分子式:182.09分子量: C7H3F5英文名稱:3,5- two f three fCAS號(hào):401-85-4
千層紙素A英文名稱:Thousand layer of paper ACAS號(hào):480-11-5分子式:284.263分子量:C16H12O5
3-喹啉分子式:154.17分子量: C10H6N2英文名稱:3- - quinolineCAS號(hào):34846-64-5
1-(4-溴)咪唑分子式:223.07分子量: C9H7BrN2英文名稱:1 -(4 -溴)咪唑CAS號(hào):10040-96-7
2-氯-4--6,7-二甲氧喹唑啉分子式:239.66分子量: C10H10ClN3O2英文名稱:2- -4-, -6, 7- twoCAS號(hào):23680-84-4
Transferrin receptor 轉(zhuǎn)鐵蛋白受體抗體 0.1ml
NRH2 死亡結(jié)構(gòu)域蛋白NRH2抗體 0.2ml
SDH/Sorbitol Dehydrogenase 山梨醇脫氫酶抗體 0.1ml
CDKN1B/P27kip1 P27抗體/周期素依賴激酶抑制劑 0.1ml
LAP18/Stathmin 白血病相關(guān)蛋白18/癌蛋白18抗體 0.1ml
Phospho-NFKB1(Ser907) 磷酸化細(xì)胞核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體 0.1ml
SHFM3 SHFM3蛋白抗體 0.2ml
ALR 肝再生增強(qiáng)因子抗體 0.1ml
NEDD1 神經(jīng)前體細(xì)胞表達(dá)蛋白1抗體 0.2ml
human C3 補(bǔ)體C3抗體 0.1ml
KCNQ-1 鉀離子通道蛋白家族KCNQ1抗體 0.1ml
phospho-NFKB p65(Ser529) 磷酸化細(xì)胞核因子抗體 0.1ml