詳細(xì)介紹
反應(yīng)五要素:
轉(zhuǎn)基因植物Bt基因核酸檢測(cè)試劑盒圖片參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當(dāng)于PCR 體積的1/10)作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
轉(zhuǎn)基因植物Bt基因核酸檢測(cè)試劑盒圖片 | 48T | PCR檢測(cè)試劑盒 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長(zhǎng)期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運(yùn)輸:采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品:
轉(zhuǎn)基因植物Bt基因核酸檢測(cè)試劑盒圖片15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
7-甲-8-硝喹啉分子式:188.19分子量: C10H8N2O2英文名稱:7- methyl -8- nitro groupCAS號(hào):7471-63-8
5--6-硝喹啉分子式:189.17分子量: C9H7N3O2英文名稱:5- amino -6- nitro groupCAS號(hào):35975-00-9
4,4’-二甲聯(lián)分子式:182.27分子量: C14H14英文名稱:4,4 '- two methyl groupCAS號(hào):613-33-2
3-氯吲唑分子式:152.58分子量: C7H5ClN2英文名稱:3- indazole chlorideCAS號(hào):29110-74-5
4-羥咔唑分子式:183.21分子量: C12H9NO英文名稱:4- hydroxy carbazoleCAS號(hào):52602-39-8
4-甲硫酸氫氯酸嘧分子式:221.7分子量: C8H12ClNO2S英文名稱:4- methyl benzyl sulfateCAS號(hào):4393-16-2
磷酸二氫鋁分子式:317.94分子量: AlH6O12P3英文名稱:Two hydrogen phosphateCAS號(hào):13530-50-2
3--4-吡甲醛分子式:122.12分子量: C6H6N2O英文名稱:3- amino -4- pyridine formaldehydeCAS號(hào):55279-29-3
(4S,4'S)-2,2'-(戊烷-3,3'-二)雙(4-芐-4,5-二氫惡唑)分子式:390.53分子量: C25H30N2O2英文名稱:(4S,4)-2,2'-(戊烷- 3,3’-二)雙(4芐- 4,5 -二氫惡唑)CAS號(hào):160191-64-0
性湖藍(lán)V英文名稱:Alphaurine VCAS號(hào):129-17-9分子式:566.66分子量: C27H31N2NaO6S2
異茴芹內(nèi)酯英文名稱:IsopimpinellinCAS號(hào):482-27-9分子式:246.22分子量:C13H10O5
轉(zhuǎn)基因植物Bt基因核酸檢測(cè)試劑盒圖片Rabbit Anti-dog IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗狗IgG 0.1ml
Notch1/MOTC 跨膜受體蛋白Notch-1抗體 0.1ml
Agpat2 溶血磷脂酸酰基轉(zhuǎn)移酶β抗體 0.2ml
MTA2 轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白2抗體 0.2ml
Calreticulin 鈣網(wǎng)蛋白抗體 0.2ml
KLHDC9 KLHDC9蛋白抗體 0.2ml
Phospho-Met (Tyr1003) 磷酸化肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(原癌基因)抗體 0.1ml
KCNMB1/Maxi Potassium channel beta 鈣激活鉀通道蛋白β1抗體 0.2ml
Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-Cy3 PE-Cy3標(biāo)記的兔抗牛IgM 0.1ml
phospho-TRADD(Ser299) 磷酸化腫瘤壞死因子受體1相關(guān)死亡域蛋白抗體 0.1ml
CD63/MLA1 黑色素瘤相關(guān)抗原抗體 0.1ml
K Cadherin 鈣粘蛋白6抗體 0.2ml