詳細介紹
反應(yīng)五要素:
蛤弧菌PCR檢測試劑盒品牌參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
使用及效果:
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子(約1/4 黃豆大小)或直徑約為0.5-0.7 cm(或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中,95℃保溫10-15 分鐘,加入0.1 mL 溶液B,混勻,直接取上清液(相當(dāng)于PCR 體積的1/10)作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 分類 |
蛤弧菌PCR檢測試劑盒品牌 | 50T | PCR檢測試劑盒 |
樣本采集、存放及運輸:
1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h,-70℃以下可長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融(zui多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品:
蛤弧菌PCR檢測試劑盒品牌15毫升錐形離心管:用于制備樣品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板:用于比色的容器
分光光度儀:用于比色分析
酶標(biāo)儀:用于微量樣品比色分析
儲存條件:
14℃或-20℃
準(zhǔn)備物品
清理液(A) 毫升
染色液(t B) 微升
稀釋液(C) 毫升
溶解液(tD) 毫升
產(chǎn)品說明書 1份
溴磷松英文名稱:Bromine and phosphorusCAS號:2104-96-3分子式:366分子量:C8H8BrCl2O3PS
4-甲酰咪唑分子式:96.09分子量: C4H4N2O英文名稱:4- aCAS號:3034-50-2
正丁分子式:134.22分子量: C10H14; C6H5(CH2)3英文名稱:Butyl benzeneCAS號:104-51-8
玫瑰桃紅R英文名稱:Bordeaux RCAS號:5858-33-3分子式:502.43分子量: C20H12N2Na2O7S2
2--3-氯-5-三氟甲吡分子式:196.56分子量: C6H4ClF3N2英文名稱:2- amino -3- -5- threeCAS號:79456-26-1
1,1'-(對二甲)雙(4,4'-二吡)二溴物分子式:576.34分子量: C28H24Br2N4英文名稱:1,1'- (two of benzene methyl (4,4'-) - pyridine bromide two) twoCAS號:106867-97-4
鈷試劑英文名稱:Cobalt reagentCAS號:131-91-9分子式:173.17分子量: C10H7NO2
4,6-二甲氧-2-(氧羰)嘧分子式:275.26分子量: C13H13N3O4英文名稱:4,6- two a -2- (phenyl group amino group)CAS號:89392-03-0
4-二乙偶氮分子式:253.34分子量: C16H19N3英文名稱:4- two - aminoazobenzeneCAS號:2481-94-9
2,3,5,6-四氟甲分子式:164.1分子量: C7H4F4英文名稱:Tetrafluorotoluene 2,3,5,6-CAS號:5230-78-4
4--1,2,3,6-四氫吡分子式:159.23分子量: C11H13N英文名稱:4- phenyl -1,2,3,6- fourCAS號:10338-69-9
蛤弧菌PCR檢測試劑盒品牌Cyclin J 周期素J抗體 0.2ml
CPT1A 肉毒堿棕櫚?;D(zhuǎn)移酶1A抗體 0.1ml
HHV8/ORF50 人類皰疹病毒8抗體 0.2ml
Rabbit Anti-rat IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗兔IgG 0.1ml
MARCH4 膜相關(guān)環(huán)指蛋白4抗體 0.2ml
phospho-ITGB4(Tyr1526) 磷酸化整合素β4抗體 0.1ml
G protein alpha G蛋白α抗體 0.2ml
CKLF 趨化素樣蛋白抗體 0.2ml
DARC/CD234 Duffy血型趨化因子受體抗體 0.2ml
CPa(Clostridium perfringens alpha toxin) A型產(chǎn)氣莢膜梭菌(魏氏梭菌) 0.2ml
Rabbit Anti-human IgM/Bio 生物素標(biāo)記的兔抗人IgM 0.3ml