詳細介紹
產品屬性:
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
HuH-7 (肝癌細胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0119 |
商品介紹:
名稱 HuH-7 (肝癌細胞) 別稱HuH-7; HUH-7; HuH7; Huh7; HUH7; JTC-39; Japanese Tissue Culture-39 種屬人類 年齡(性別)男性 組織來源肝;肝癌 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)上皮細胞樣 背景描述據說,HuH-7細胞可產甲胎蛋白、胰酶α抗體、血漿銅藍蛋白、纖維蛋白原、纖維粘連蛋白等。 生長培養(yǎng)基DMEM+10% FBS+1% P/S 推薦傳代比例1:2-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液:55% 基礎培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 溫度:37℃ |
冷凍保存細胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,并經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
B細胞活化因子受體(BAFF-R)免疫試劑盒進口、組裝
β內啡肽(β-EP)免疫試劑盒進口、分裝
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白γ-1 鏈C 區(qū)(IGHGI)免疫試劑盒進口、分裝
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大鼠促甲狀腺素(TSH)免疫試劑盒進口、分裝
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HuH-7 (肝癌細胞) 2 ug pCMV5 (no Nde I) pCMV5 (no Nde I) 低溫運輸,-20℃保存
亞硫酸鐵瓊脂 250g
2 ug pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP 低溫運輸,-20℃保存
50T 人E-選擇素S128R基因多態(tài)性檢測試劑盒(PCR-RLFP) 低溫運輸,-20℃保存
25 mg SPQ(6-甲氧基-N-(3-磺丙基)) Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
500mL Carbonate Buffered Saline(鹽緩沖鹽水),5X,pH9.0 Carbonate Buffered Saline,5X,pH9.0 常溫保存
10mL 電泳級二甲苯藍FF溶液 Xylene Cyanol Solution,EG 常溫密封干燥避光保存