冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱 HT22 (小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞) 種屬小鼠 年齡(性別)不詳 組織來源大腦;海馬體 生長特性貼壁細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)神經(jīng)細(xì)胞樣 生物安全等級2 生長培養(yǎng)基DMEM+10% FBS+1% P/S 推薦傳代比例1:4-1:6 推薦換液頻率2~3次/周 凍存條件 凍存液:55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度:液氮 培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5% 溫度:37℃ |
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
CMA1 基因全長ORF克隆
CTR9 基因全長ORF克隆
CPSF3 基因全長ORF克隆
GRPR 基因全長ORF克隆
CPXCR1 基因全長ORF克隆
APLNR 基因全長ORF克隆
DCIR / CLEC4A / CLECSF6 基因全長ORF克隆
CRTC2 基因全長ORF克隆
JAK3 基因全長ORF克隆
GPBAR1 基因全長ORF克隆
HT22 (小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞)7.8-500 pg/mL ELISA Kit for Human Serine/threonine-protein kinase PLK1
31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Dipeptidyl peptidase 2
62.5-4000 pg/mL 人妊娠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)ELISA試劑盒
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Solute carrier family 2, facilitated glucose transporter member 1
0.156-10 ng/mL 人受體β(RAR-beta)ELISA試劑盒
78-5000 pg/mL 肺炎鏈球菌(SP)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)
指示選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ) 英文名稱:Direct selective medium-based 產(chǎn)品規(guī)格:250g
平板計數(shù)瓊脂(PCA)顆粒 英文名稱:Plate Count Agar 產(chǎn)品規(guī)格:300ml/袋*10
15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Interleukin-29
Rustigian氏尿毒試驗用培養(yǎng)基 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250g