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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-04-24 10:42:32瀏覽次數(shù)：271
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | GOY-01X1397 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1397 |
商品介紹：
名稱 大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞 2.組織來源：腦組織 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞分離自腦皮層組織；大腦分左右兩個(gè)半球，大腦皮質(zhì)（灰質(zhì)）覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。少突膠質(zhì)細(xì)胞分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，在銀浸染標(biāo)本中，少突膠質(zhì)細(xì)胞比星狀膠質(zhì)細(xì)胞小，其突起也較小而少，呈珠狀，故被稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞或寡突膠質(zhì)細(xì)胞。少突膠質(zhì)細(xì)胞（oligodendrocyte）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）的成髓鞘神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，其發(fā)育要經(jīng)歷少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞、前少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞、未成熟和成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞等階段。有學(xué)者將少突膠質(zhì)細(xì)胞按其發(fā)育程度和形態(tài)分為三型。但是，細(xì)胞發(fā)育是一個(gè)連續(xù)的過程，其形態(tài)、表達(dá)產(chǎn)物和功能的演變沒有嚴(yán)格的界限，因此，其分類是相對(duì)的。這三型分別為：Ⅰ型少突膠質(zhì)細(xì)胞又稱前O2A（pre-O2A progenitor cell）。細(xì)胞呈圓形，表面光滑，直徑約3μm，體外混合培養(yǎng)時(shí)成簇生長在星形膠質(zhì)表面，具有很強(qiáng)的分裂增殖潛力，表達(dá)神經(jīng)節(jié)苷脂GM1、波形蛋白和多唾液酸—神經(jīng)粘附分子（polysialic acid-neural cell adhesion molecule，PSA-NCAM）等。Ⅱ型少突膠質(zhì)細(xì)胞胞體常有雙極或三極突起，極少數(shù)為單極突起，直徑約7μm，有一定的分裂增殖能力。體外培養(yǎng)時(shí)為雙潛能細(xì)胞，既可分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞又可分化為Ⅱ型星形膠質(zhì)，故又稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞-Ⅱ型星形膠質(zhì)祖細(xì)胞（oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell，O2A）。O2A除表達(dá)GM1和波形蛋白外還表達(dá)神經(jīng)節(jié)苷脂GD3和GQ（淋巴雜交瘤株A2B5產(chǎn)生GQ的抗體），故常用A2B5抗體標(biāo)記O2A。Ⅲ型少突膠質(zhì)細(xì)胞不再具有分裂增殖能力，為分裂終期細(xì)胞。直徑約10μm。根據(jù)其形成髓鞘的能力，又分為不成熟的和成熟的兩類少突膠質(zhì)細(xì)胞。不成熟的OL胞體常伸出4～5條較粗大突起，表面還殘留有A2B5標(biāo)記物，同時(shí)也表達(dá)O1-O4抗原，無形成髓鞘的能力。成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞突起有如蜘蛛網(wǎng)，大量表達(dá)半乳糖腦苷脂（galactocerebro side，GC）、蛋白脂蛋白（proteio lipid protein，PLP）、髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein，MBP）等，有對(duì)軸突髓鞘化的能力。體外培養(yǎng)的少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞（簡稱少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞）包括前O2A和O2A和未成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞，前兩者具有增殖能力。 5.方法簡介： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)細(xì)胞采用胰蛋白酶消化、混合細(xì)胞營養(yǎng)缺失培養(yǎng)、搖床振蕩結(jié)合差速貼壁法并通過專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞經(jīng)A2B5免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml） 培養(yǎng)基含B-27、PDGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-R308 換液頻率每2-3天換液一次； 生長特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)雙極、多極形 傳代特性不傳代，不增殖，存活1-2周 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
甲型流感 H4N4 (A/mallard duck/Alberta/299/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 IL9R / Interleukin 9 receptor 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
甲型流感 H1N1 (A/Beijing/22808/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
甲型流感 H12N1 (A/mallard duck/Alberta/342/1983) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
甲型流感 H6N4 (A/chicken/HongKong/17/77) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/S1211394/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
甲型流感 H4N8 (A/chicken/Alabama/1/1975) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
甲型流感 H4N4 (A/mallard duck/Alberta/299/1977) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
小鼠 CD55 / DAF 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
NGFR/ P75 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞N-甲基-N-基硅烷三氟乙酰 GC，≥98.5%鐵 99.99% metals basisIntegrin alpha 1 整合素α1抗原
N-甲基-N-基硅烷三氟乙酰 95%還原鐵粉 AR，100目Integrin Alpha4 Beta7/LPAM-1 (Lymphocyte Peyer’s patch Adhesion Molecule 1/Integrin alpha4,beta7) 整合素α4β7抗原
炔酸甲酯 97%還原鐵粉 CP，100目Integrin AlphaE2/CD103 整合素αE2抗原
4-甲基-3-硝基吡 97%還原鐵粉 98%，400目ENPP3/CD203c(ectonucleotide pyrophosphatase/phosphodiesterase 3) ENPP3抗原
2-甲基-3-丁炔-2- 98%鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液1.19-1.35mg/L,用于水分析IQGAP1 支架蛋白抗原
3-甲氧基苯基酸 97%納米鐵粉 99.9%，50nmIRF-1(Interferon regulatory factor-1) 干擾素調(diào)節(jié)因子抗原
4-甲氧基苯基酸 97%納米鐵粉 99.9%，80nmIRAK 2(IL-1 Receptor-associated Kinase 2) 白介素-1受體相關(guān)激2抗原
N-甲基-N-(基硅基)乙酰 97%苯乙酮 GCS,≥99.5% (GC)IL-1RA (Interleukin-1 receptor antagonist)peptide 白介素-1受體拮抗劑抗原
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