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詳細介紹
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
產品屬性：
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠脈絡膜微血管內皮細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1209 |
商品介紹：
名稱 大鼠脈絡膜微血管內皮細胞 2.組織來源：脈絡膜組織 3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 大鼠脈絡膜微血管內皮細胞分離自眼球脈絡膜組織；脈絡膜在視網膜和鞏膜之間，含有豐富血管和色素細胞，對外力沖擊的耐受性較視網膜差，當眼球受到從前面來的外力的沖擊作用通過玻璃體傳到后極部時，堅硬的鞏膜在其外面又有抵抗作用，使脈絡膜在內外兩種作用夾攻下而發(fā)生破裂和出血。脈絡膜呈暗褐色，圍繞視神經乳頭部有照膜，為青綠色帶金屬光澤的三角形區(qū)。脈絡膜是眼球中膜的后2/3處的薄膜，由纖維組織、小血管和毛細血管組成，軟而薄，棕紅色，在鞏膜和視網膜之間，續(xù)連于睫狀體后方。脈絡膜的血循環(huán)營養(yǎng)視網膜外層，其含有的豐富色素起遮光暗房作用。主要功能是營養(yǎng)視網膜外層及玻璃體，并有遮光作用，使反射的物象清楚。同時對視覺系統起保護作用，對整個視覺神經有調節(jié)作用。續(xù)連于睫狀體后方，含豐富的血管和色素細胞，有營養(yǎng)和遮光作用。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠脈絡膜微血管內皮細胞采用膠原酶-中性蛋白酶混合消化法結合密度梯度離心法、最后通過內皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的大鼠脈絡膜微血管內皮細胞經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%） 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-R173 換液頻率每2-3天換液一次 生長特性貼壁 細胞形態(tài)內皮細胞樣 傳代特性可傳2-3代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
PLAUR / CD87 / uPAR ELISA配對抗體
CD30 / TNFRSF8 ELISA配對抗體
REG1B ELISA配對抗體
PHPT1 ELISA配對抗體
IkB alpha / NFKBIA ELISA配對抗體
小鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A ELISA配對抗體
小鼠 TFPI ELISA配對抗體
小鼠 Carboxypeptidase B1 / CPB1 ELISA配對抗體
FGFR4 / CD334 ELISA配對抗體
Cystatin SA / CST2 ELISA配對抗體
大鼠脈絡膜微血管內皮細胞人游離蛋白SBacillus subtilis subsp. subtilis谷轉移檢測試劑盒
人異常原Bacillus subtilis subsp. subtilis補體蛋白1檢測試劑盒
人循環(huán)復合物Bacillus subtilis subsp. subtilis心鈉肽檢測試劑盒
人血小板相關抗體IgMBacillus subtilis subsp. subtilis白脂素檢測試劑盒
人血纖肽/纖維蛋白肽ALactobacillus acidophilus血小板CD41-IgG抗體檢測試劑盒
人纖溶原Bacillus subtilis subsp. subtilis血小板相關IgG抗體檢測試劑盒
人性T相關抗原4Bacillus subtilis subsp. subtilis炭疽桿抗體檢測試劑盒
人球蛋白輕鏈lambdaBacillus subtilis subsp. subtilis25羥基膽固檢測試劑盒
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