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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價 | 面議 |
更新時間：2022-04-06 09:12:49瀏覽次數(shù)：306
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | GOY-01X0129 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| K-562 [K562] (慢性髓原白血病細(xì)胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0129 |
商品介紹：
名稱 K-562 [K562] (慢性髓原白血病細(xì)胞) 別稱K562; K 562; GM05372 種屬人類 年齡（性別）女性，53歲 組織來源骨髓；慢性骨髓性白血病(CML) 生長特性懸浮細(xì)胞 細(xì)胞形態(tài)淋巴細(xì)胞樣 背景描述連續(xù)細(xì)胞株K-562是由Lozzio從一位臨終的53歲女性慢性骨髓性白血病患者的胸水中建立。K-562細(xì)胞被歸入高度未分化的粒性白細(xì)胞類，Erson等對其表面膜性質(zhì)的研究表明，K-562細(xì)胞是一株人類紅白血病細(xì)胞。K-562細(xì)胞在自然殺傷分析中廣泛作為高敏感的體外受體，See Pross等將K-562細(xì)胞用于NK細(xì)胞的體外詳細(xì)檢測，包括NK細(xì)胞活性的數(shù)學(xué)量化。K-562母細(xì)胞是多能性造血惡性細(xì)胞，它能自發(fā)分化成可識別的紅血球祖細(xì)胞、粒性白細(xì)胞、單核細(xì)胞等。K-562細(xì)胞是EBNA陰性的。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基IMDM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例3×10^5-5×10^5cells/mL 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~30-48小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ 致瘤性Yes, in nude mice (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells). 注意事項(xiàng)該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請注意離心收集細(xì)胞懸液；請勿直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液。 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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K-562 [K562] (慢性髓原白血病細(xì)胞) 50次 DNA電泳分子量標(biāo)準(zhǔn)（300-10000bp） DNAMETER 4℃保存
2 ug pGL4.18[luc2P/Neo] pGL4.18[luc2P/Neo] 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
抗生素檢定培養(yǎng)基 8 號 250g
1瓶 FaDu細(xì)胞株 FaDu 低溫運(yùn)輸和保存
含225ml FB1增菌液均質(zhì)袋 FB1 Broth 10個/包
2000U 綠豆核酸 Mung Bean Nuclease -20℃保存
500mL Potassium Phosphate Solution，0.2M, pH8.0 Potassium Phosphate Solution，0.2M, pH8.0 常溫保存
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