冷凍保存細(xì)胞之方法?
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí), 以防止冰晶過(guò)大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性:
商品介紹:
名稱(chēng) 膠質(zhì)瘤組織源細(xì)胞 2.組織來(lái)源:膠質(zhì)瘤組織 3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介: 人膠質(zhì)瘤組織源細(xì)胞分離自癌組織;癌(cancer)是指起源于上皮組織的惡性腫瘤,是惡性腫瘤中最常見(jiàn)的一類(lèi)。相對(duì)應(yīng)的,起源于間葉組織的惡性腫瘤統(tǒng)稱(chēng)為肉瘤。有少數(shù)惡性腫瘤不按上述原則命名,如腎母細(xì)胞瘤、惡性畸胎瘤等。一般人們所說(shuō)的“癌癥"習(xí)慣上泛指所有惡性腫瘤。癌癥具有細(xì)胞分化和增殖異常、生長(zhǎng)失去控制、浸潤(rùn)性和轉(zhuǎn)移性等生物學(xué)特征,其發(fā)生是一個(gè)多因子、多步驟的復(fù)雜過(guò)程,分為致癌、促癌、演進(jìn)三個(gè)過(guò)程,與吸煙、感染、職業(yè)暴露、環(huán)境污染、不合理膳食、遺傳因素密切相關(guān)。癌細(xì)胞,是一種變異的細(xì)胞,是產(chǎn)生癌癥的病源。癌細(xì)胞與正常細(xì)胞不同,有無(wú)限增殖、可轉(zhuǎn)化和易轉(zhuǎn)移三大特點(diǎn),能夠無(wú)限增殖并破壞正常的細(xì)胞組織。癌細(xì)胞除了分裂失控外(能進(jìn)行多極分裂),還會(huì)局部侵入周?chē)=M織甚至經(jīng)由體內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)或淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移到身體其他部分。分惡性和良性?xún)煞N。 5.方法簡(jiǎn)介: 實(shí)驗(yàn)室分離的癌組織源細(xì)胞采用膠原酶消化、經(jīng)Percoll離心純化制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè): 實(shí)驗(yàn)室分離的人膠質(zhì)瘤組織源細(xì)胞經(jīng)檢測(cè),純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息: 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-H148 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性貼壁 細(xì)胞形態(tài)梭形、多角形 傳代特性可傳5代左右;3代以?xún)?nèi)狀態(tài)最佳 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%;CO2,5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
STK19 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
CEACAM7 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
ANP32A 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
IFNA6 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
CLC 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
IL17B 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
PLXNB1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
TNFRSF13B 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
SIRT4 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
FSHB 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽
膠質(zhì)瘤組織源細(xì)胞0.312-20 ng/mL 氣單胞菌(Asp)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?
醇麥康凱瓊脂(SMAC)平板(9cm) 英文名稱(chēng):Sorbitol Maconkey Agar Base 產(chǎn)品規(guī)格:10個(gè)/包
0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Ras-related protein Rab-8A
采樣吸取液1-GVPC液體培養(yǎng)基添加劑 英文名稱(chēng): 產(chǎn)品規(guī)格:1ml*3支/管
0.312-20 ng/mL 柯薩奇病毒A16型(CAV-16)核酸檢測(cè)試劑盒(RT-PCR法)
12.5-800 pg/mL ELISA Kit for Human MAGUK p55 subfamily member 6
改良克氏雙糖鐵培養(yǎng)基管 英文名稱(chēng): 產(chǎn)品規(guī)格:5ml*20支
7%NaCl胰胨水 英文名稱(chēng): 產(chǎn)品規(guī)格:20支
0.625-40 ng/mL ELISA Kit for Human Gremlin-1
VTM運(yùn)送培養(yǎng)基() 英文名稱(chēng): 產(chǎn)品規(guī)格:5ml×20支/盒