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詳細介紹
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產品屬性：
產品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| 大鼠髖臼軟骨細胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1417 |
商品介紹：
名稱 大鼠髖臼軟骨細胞 2.組織來源：軟骨組織 3.產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 4.細胞簡介： 大鼠髖臼軟骨細胞分離自髖關節(jié)軟骨組織，髖關節(jié)是人體最大、的關節(jié)之一，是典型的球臼關節(jié)。髖關節(jié)既具有良好的內在穩(wěn)定性，也具有靈活的活動性。髖臼位于髖骨外側面中央，呈半球形深凹，直徑約30~50mm，表面覆蓋厚約2mm的透明關節(jié)軟骨，呈半月形分布。中央是髖臼窩，無軟骨覆蓋，由哈佛腺充填，可以隨關節(jié)內壓力的增減擠出或者吸入關節(jié)液，以維持關節(jié)內壓力的平衡。髖臼邊緣的環(huán)形關節(jié)盂唇可以加深、加寬髖臼，使髖臼容納股骨頭的大部并處于穩(wěn)定的位置，加強了髖關節(jié)的穩(wěn)定性。幼稚的關節(jié)軟骨細胞位于關節(jié)軟骨組織的表層，單個分布、體積較小、呈橢圓形，長軸與關節(jié)軟骨表面平行，越向深層的關節(jié)軟骨細胞體積之間增大呈圓形，細胞核圓形或卵圓形、染色淺，細胞質弱嗜堿性，常見數(shù)量不一的脂滴。成熟的關節(jié)軟骨細胞多2-8個成群分布于關節(jié)軟骨陷窩內，這些關節(jié)軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成，稱為同源細胞群。電鏡下，關節(jié)軟骨細胞有突起和皺褶，細胞質內有大量的粗面內質網和發(fā)達的高爾基復合體及少量的線粒體。在組織切片中，關節(jié)軟骨細胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的關節(jié)軟骨細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。 5.方法簡介： 實驗室分離的大鼠髖臼軟骨細胞采用膠原酶聯(lián)合中性蛋白酶消化制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。 6.質量檢測： 實驗室分離的大鼠髖臼軟骨細胞經Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產品貨號CM-R318 換液頻率每2-3天換液一次； 生長特性貼壁 細胞形態(tài)梭形、多角形 傳代特性可傳3代左右 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 BAFFR / TNFRSF13C / CD268 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
F13B / Coagulation factor XIII B chain 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 CXCL12 / SDF-1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
CFD / Adipsin 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
雪貂 CD4 / Leu-3 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 PLA2G12B / PLA2G13 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CTSL / Cathepsin-L 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
Epiregulin / EREG 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
Arginase-1 / ARG1 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 CFD / Adipsin 細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠髖臼軟骨細胞對羥基苯甲酸酯 GR,99.0%5′-O-(4,4′-二甲氧基三苯甲基)胸苷 98.0%Anti-Nogo R/NGR /FITC 熒光素標記軸索過度生長抑制因子受體/Nogo受體抗體IgG
5-氯-2-(2,4-二氯苯氧基) 97%烯式酮酸 99%Anti-Nitric oxide/NO/FITC 熒光素標記一氧化氮抗體IgG
結晶紫 AR馬尿酸 98%Anti-NOS-1/bNOS/neuronal NOS/nNOS /FITC 熒光素標記一氧化氮合成-1抗體（神經型）IgG
乙二四乙酸二鈉鎂 98%1,6-二己烷 98%, 含銅屑穩(wěn)定劑Anti-NOS-2/iNOS /FITC 熒光素標記一氧化氮合成-2抗體（誘導型）IgG
3-(4-吡基)-D- 98%5-己烯-1- 97%Anti-NOS-2/iNOS/FITC 熒光素標記一氧化氮合成-2抗體（誘導型）IgG
(S)-(+)-2--3-羥基-3-甲基丁酸 98%三氟磺酸 99%Anti-NuMA/FITC 熒光素標記核有絲分裂器NuMA蛋白抗體IgG
(2S,3R)-(+)-2--3-羥基-4-甲基戊酸 98%三氟磺酰氯 99%Anti-Phospho-NuMA (Ser395) /FITC 熒光素標記化核有絲分裂器NuMA蛋白抗體IgG
(S)-(-)-2--4-戊烯酸 98%死蜱 分析標準品，99%Anti-NUMB/FITC 熒光素標記膜相關蛋白Numb抗體IgG
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