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詳細(xì)介紹
冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
| 大鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X1423 |
商品介紹：
名稱 大鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞 2.組織來源：骨髓 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡(jiǎn)介： 大鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞分離自骨髓；骨髓是機(jī)體的造血組織，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動(dòng)物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細(xì)菌、病毒等；某些淋巴細(xì)胞能抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長(zhǎng)骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時(shí)，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細(xì)胞增多，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代，最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓單個(gè)核細(xì)胞是骨髓中具有單個(gè)核的細(xì)胞，包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。注意這里是（mononuclear cell）單個(gè)核細(xì)胞，而不是（Monocyte）單核細(xì)胞。單個(gè)核細(xì)胞的體積、形態(tài)和比重與骨髓其他細(xì)胞不同，利用一定比例聚蔗糖和泛影酸鈉形成的等滲溶液作密度梯度離心，使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布，可將各種血細(xì)胞與單個(gè)核細(xì)胞分離。 5.方法簡(jiǎn)介： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞采用取骨髓、通過密度梯度離心法制備而來制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測(cè)： 實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)過檢測(cè)，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等 產(chǎn)品貨號(hào)CM-R322 換液頻率每2-3天換液一次 生長(zhǎng)特性半貼壁半懸浮 細(xì)胞形態(tài)圓形 傳代特性不增殖；不傳代 消化液0.25%胰蛋白酶 培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5% |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
小鼠 KIRREL3 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
IL-24 / Interleukin-24 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
OMG / OMGP (aa 1-420) 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
OMG / OMGP (aa 1-416) 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
FCGRT & B2M Heterodimer 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
食蟹猴 CD32a / FCGR2A 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 E-selectin / ELAM-1 / CD62E 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
甲型流感 H5N1 (A/whooper swan/Mongolia/244/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠 FCAR / CD89 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
CST1 / Cystatin-1 / Cystatin-SN 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
大鼠骨髓單個(gè)核細(xì)胞Halomonas sp.二氫辣椒素檢測(cè)試劑盒
Marinobacter sp.辣椒素檢測(cè)試劑盒
Corynebacterium ammoniagenes抗氧化檢測(cè)試劑盒
Microbacterium sp.法尼基焦合檢測(cè)試劑盒
Halorubrum sp.角鯊烯單加氧;鯊烯環(huán)氧檢測(cè)試劑盒
Halorubrum californiensisβ-香樹脂合成檢測(cè)試劑盒
Halorubrum sp.鯊烯合檢測(cè)試劑盒
Halorubrum sp.抗性淀粉檢測(cè)試劑盒
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