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elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說明書實驗?zāi)康?/h3>
閱讀：227 發(fā)布時間：2017-10-6
elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說明書法測定單克隆抗體的效價點擊次數(shù)：482 發(fā)布時間：2013/12/27
一、ELISA試劑盒實驗?zāi)康?br />1、深入了解ELISA法測定抗體效價的原理。
2、掌握ELISA法測定單克隆抗體效價的方法。
二、實驗原理
ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。免疫酶技術(shù)是將酶標記在抗體/抗原分子上，形成酶標抗體/酶標抗原，稱為酶結(jié)合物。該酶結(jié)合物的酶在免疫反 應(yīng)后，作用于底物使之呈色，根據(jù)顏色的有無和深淺，定位或定量抗原/抗體。ELISA 法是免疫酶技術(shù)的一種，其特點是利用聚苯乙烯微量反應(yīng)板(或球)吸附抗原/抗體，使之固相化，免疫反應(yīng)和酶促反應(yīng)都在其中進行。在每次反應(yīng)后都要反復(fù)洗 滌，這既保證了反應(yīng)的定量關(guān)系，也避免了末反應(yīng)的游離抗體/抗原的分離步驟。ELISA試劑盒在ELISA 法中。酶促反應(yīng)只進行一次，而 抗原、抗體的免疫反應(yīng)可進行一次或數(shù)次，即可用二抗(抗抗體)、三抗再次進行免疫反應(yīng)。
目前常用的幾種ELISA方法有：測定抗體的間接法，測定抗原的雙抗體夾心法和測定抗原的競爭法等。本實驗采用間接法測定單克隆抗體效價。其主要過程為：首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應(yīng)板的凹孔內(nèi)，加待測抗體，保溫后洗滌以除去未結(jié)合的雜蛋白質(zhì)，加酶標抗抗體，保溫后洗滌，加底物保溫30分鐘后，加酸或堿終止酶促反應(yīng)，用目測或光電
比色測定抗體含量。
三、操作步驟
①抗原包被：兔抗人IgG 作為抗原，用包被液l：8000稀釋，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應(yīng)板中。4℃放置過夜。
②洗滌：次日傾去凹孔內(nèi)的液體，洗滌液洗3次。
③封閉：加l00μL/孔封閉液，室溫放置0.5h.
④洗滌：用洗滌液洗3次。
⑤加待測樣品(一抗)：將含單克降抗體的細胞培養(yǎng)上清在另-塊板上用PBS 連續(xù)稀釋(按照1：2或1：10)，100μL /孔加到 已包被的板上，每個樣品平行做兩份，PBS 或空白培養(yǎng)基作為陰性對照，已知樣品作為陽性對照。加蓋37℃恒溫箱溫育 1~2h。
⑥洗滌：用洗滌液洗3次。
⑦加酶標抗抗體：兔抗鼠IgG-HRP，用封閉液l ：8000稀釋，100μL／孔，加蓋37℃恒溫箱溫育1h。
⑧洗滌：用洗滌液洗5次，蒸餾水洗2次。
⑨顯色：加新鮮配制的底物溶液100μL/孔，室溫暗處放置5～30min，顯示藍色。
⑩終止反應(yīng)、比色：加50μL/孔終止液。elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說明書顏色變黃；用酶標儀測定450nm 處各孔的吸光值，陽性反應(yīng)的zui大稀釋度為待測 樣品的效價。
* 11169 霉菌和酵母菌顯色培養(yǎng)基 1000ml/瓶
* 10102 磷酸鹽緩沖液（pH7.2） 250g/瓶 用于樣品稀釋（GB、SN）
* 10135 pH7.4 磷酸鹽緩沖液（PBS） 250g/瓶 用于樣品的稀釋、制備（中國藥典）
* 10136 pH7.2 磷酸鹽緩沖液 250g/瓶 0.03mol/L ，用 于 樣 品制 備 和稀 釋（國家消毒技術(shù)規(guī)范）
* 10137 無菌檢驗用洗脫液 250g/瓶 含 PBS，用于樣品的制備（國家消 毒技術(shù)規(guī)范）
* 10138 胰蛋白胨生理鹽水溶液（TPS） 250g/瓶 用于樣 品稀 釋（國 家消 毒技 術(shù)規(guī) 范）
elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說明書
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一、ELISA試劑盒實驗?zāi)康?br />1、深入了解ELISA法測定抗體效價的原理。
2、掌握ELISA法測定單克隆抗體效價的方法。
二、實驗原理
ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。免疫酶技術(shù)是將酶標記在抗體/抗原分子上，形成酶標抗體/酶標抗原，稱為酶結(jié)合物。該酶結(jié)合物的酶在免疫反 應(yīng)后，作用于底物使之呈色，根據(jù)顏色的有無和深淺，定位或定量抗原/抗體。ELISA 法是免疫酶技術(shù)的一種，其特點是利用聚苯乙烯微量反應(yīng)板(或球)吸附抗原/抗體，使之固相化，免疫反應(yīng)和酶促反應(yīng)都在其中進行。在每次反應(yīng)后都要反復(fù)洗 滌，這既保證了反應(yīng)的定量關(guān)系，也避免了末反應(yīng)的游離抗體/抗原的分離步驟。ELISA試劑盒在ELISA 法中。酶促反應(yīng)只進行一次，而 抗原、抗體的免疫反應(yīng)可進行一次或數(shù)次，即可用二抗(抗抗體)、三抗再次進行免疫反應(yīng)。
目前常用的幾種ELISA方法有：測定抗體的間接法，測定抗原的雙抗體夾心法和測定抗原的競爭法等。本實驗采用間接法測定單克隆抗體效價。其主要過程為：首先將已知定量抗原吸附在聚苯乙烯微量反應(yīng)板的凹孔內(nèi)，加待測抗體，保溫后洗滌以除去未結(jié)合的雜蛋白質(zhì)，加酶標抗抗體，保溫后洗滌，加底物保溫30分鐘后，加酸或堿終止酶促反應(yīng)，用目測或光電
比色測定抗體含量。
三、操作步驟
①抗原包被：兔抗人IgG 作為抗原，用包被液l：8000稀釋，100μL/孔加入聚苯乙烯96孔反應(yīng)板中。4℃放置過夜。
②洗滌：次日傾去凹孔內(nèi)的液體，洗滌液洗3次。
③封閉：加l00μL/孔封閉液，室溫放置0.5h.
④洗滌：用洗滌液洗3次。
⑤加待測樣品(一抗)：將含單克降抗體的細胞培養(yǎng)上清在另-塊板上用PBS 連續(xù)稀釋(按照1：2或1：10)，100μL /孔加到 已包被的板上，每個樣品平行做兩份，PBS 或空白培養(yǎng)基作為陰性對照，已知樣品作為陽性對照。加蓋37℃恒溫箱溫育 1~2h。
⑥洗滌：用洗滌液洗3次。
⑦加酶標抗抗體：兔抗鼠IgG-HRP，用封閉液l ：8000稀釋，100μL／孔，加蓋37℃恒溫箱溫育1h。
⑧洗滌：用洗滌液洗5次，蒸餾水洗2次。
⑨顯色：加新鮮配制的底物溶液100μL/孔，室溫暗處放置5～30min，顯示藍色。
⑩終止反應(yīng)、比色：加50μL/孔終止液。elisa酶聯(lián)免疫試劑盒說明書顏色變黃；用酶標儀測定450nm 處各孔的吸光值，陽性反應(yīng)的zui大稀釋度為待測 樣品的效價。
* 11169 霉菌和酵母菌顯色培養(yǎng)基 1000ml/瓶
* 10102 磷酸鹽緩沖液（pH7.2） 250g/瓶 用于樣品稀釋（GB、SN）
* 10135 pH7.4 磷酸鹽緩沖液（PBS） 250g/瓶 用于樣品的稀釋、制備（中國藥典）
* 10136 pH7.2 磷酸鹽緩沖液 250g/瓶 0.03mol/L ，用 于 樣 品制 備 和稀 釋（國家消毒技術(shù)規(guī)范）
* 10137 無菌檢驗用洗脫液 250g/瓶 含 PBS，用于樣品的制備（國家消 毒技術(shù)規(guī)范）
* 10138 胰蛋白胨生理鹽水溶液（TPS） 250g/瓶 用于樣 品稀 釋（國 家消 毒技 術(shù)規(guī) 范）
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