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犬免疫球蛋白G（IGG）elisa試劑盒使用說明書
閱讀：186 發(fā)布時間：2017-4-27| 提 供 商 | 上海谷研實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 63.9KB |
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| 資料類型 | JPG 圖片 | 瀏覽次數(shù) | 186次 |
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本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中犬免疫球蛋白G(IGG)的水平。向預(yù)先包被了犬免疫球蛋白G(IGG)單克隆抗體的酶標孔中加入免疫球蛋白G(IGG)，溫育；溫育后，加入生物素標記的抗IGG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中犬免疫球蛋白G(IGG)的濃度呈正相關(guān)。
標本要求
1．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
2．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
犬免疫球蛋白G（IGG）elisa試劑盒操作程序
標準品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）：
480μg/ml
（5號標準品）
120μl的原倍標準品加入120μl的標準品稀釋液
240μg/ml
（4號標準品）
120μl的5號標準品加入120μl的標準品稀釋液
120μg/ml
（3號標準品）
120μl的4號標準品加入120μl的標準品稀釋液
60μg/ml
（2號標準品）
120μl的3號標準品加入120μl的標準品稀釋液
30μg/ml
（1號標準品）
120μl的2號標準品加入120μl的標準品稀釋液
根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
加樣：1）空白孔：空白對照孔不加樣品，生物素標記的抗IGG抗體，鏈霉親和素-HRP，只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同；2）標準品孔：加入標準品50μl，鏈霉素-HRP50μl（標準品中已事先整合好生物素抗體，故不加）；3)待測樣品孔:加入樣本40μl，然后各加入抗- IGG抗體10μl、鏈酶親和素-HRP50μl，蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37℃溫育60分鐘。
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。
終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。
9.根據(jù)標準品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。犬免疫球蛋白G（IGG）elisa試劑盒也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。