本產(chǎn)品包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液,濃度為2×。具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等優(yōu)點,可最大限度的減少人為誤差。使用時只需加入DNA模板和引物既可。
本產(chǎn)品使用方便快捷,能避免 PCR 操作過程中的污染,使用時只需取適量
2×Taq PCR Mix溶液,加入模板和引物,并加入去離子水補足體積,使 PCR Mix溶液濃度為1×即可進行反應。使用前請保證充分溶解并混勻,操作需在冰上進行。
本產(chǎn)品有含紅色染料,使用含染料的產(chǎn)品在 PCR 反應完成后,不需添加上樣緩沖液即可直接 上樣進行電泳;也可經(jīng)過純化處理,以用于酶切、連接、熒光測序等后續(xù)操作。
使用方法(用戶需自備的試劑:DNA 模板、引物。 操作示例:以20 µl PCR反應體系為例):
按照下表配制 PCR 反應體系
組分 | 體積 |
DNA模板 | 1ul |
正向引物(10um) | 0.4ul |
反向引物(10um) | 0.4ul |
2×Taq PCR Mix | 10ul |
ddH2O | 補足至20ul |
2. PCR 反應循環(huán)的設(shè)置
流程 | 溫度 | 時間 |
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預變性 | 94℃ | 2min |
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變性 | 94℃ | 30s | 25-32循環(huán) |
退火 | 55-65℃ | 30s |
延伸 | 72℃ | 60 s/kb |
終延伸 | 72℃ | 5-10min |
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注:模板量:10-1000 ng 基因組 DNA,1-30 ng 質(zhì)粒,或 1-2 μl RT-PCR 反應后的 cDNA。 注 : 以上舉例為常規(guī) PCR 反應系統(tǒng) , 僅供參考。實際反應條件因模板、引物等的結(jié)構(gòu)不同而各異 , 需根據(jù)模板、 引物、 目的片段的特點設(shè)定最佳反應條件,并根據(jù)比例放大或縮小反應體系。
3. 結(jié)果檢測:取 2 μl 反應液電泳觀察結(jié)果。含染料產(chǎn)品可直接上樣電泳,無染料產(chǎn)品需添加上樣緩沖液后進行電泳。